凝胶过滤层析的原理和PAGE 里学到的分子筛效应有何不同?
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/11/18 21:00:53
a,b,c凝胶过滤层析中,分子量越大的蛋白流出的越快.(用一系列已知分子量的标准品放入同一凝胶柱内,在同一条件下层析,记录每一分钟成分的洗脱体积,并以洗脱体积对分子量的对数作图,在一定分子量范围内可得
SDS-PAGE、琼脂糖
选c亲和柱/亲和膜,都是医用分离器.如除内毒素亲和柱,以Sepharose4B为基质,配基为组氨酸,壳聚糖,季铵盐等
所有的层析在原理上都是相通的,区别在于流动相和层析剂之间的作用力的不同.离子交换是利用蛋白质表面的电荷与层析剂上的离子基团的静电作用.凝胶过滤层析利用了凝胶的多孔性,根据溶剂分子的大小进行分离.
分子筛作用.柱子里面有填料,填料是一些粒子,粒子里面有很多的孔,分子比较小的能进入到粒子的孔里面,二分子比较大的就会在粒子旁边流下来.所以用一些蛋白或者是多糖过分子筛,分子大的会先流下来,分子小的后流
在坐标纸上画出来的图应该有两个波峰,一个是血红素在540nm波长下有一个明显的吸收峰,核黄素在450nm波长下有一个明显的波峰
凝胶过滤是通过分子大小来分离不同的物质的,很多时候用于蛋白溶液的脱盐;对于成分分子量大小确定的蛋白溶液,可以通过比较分子量大小估计目的蛋白的洗脱时间,如果不确定各种蛋白的性质,只能接下每个蛋白峰然后鉴
没问题的.普通的玻璃层析柱只是做离子交换、凝胶层析压力没问题,一般也用不到什么有机溶剂,所以放心用吧.
圆盘电泳的分子筛效应,分子越大阻力越大,泳速越慢;凝胶过滤的分子筛效应,分子越大路程越近,层析越快.
原理简单说就是分子量不同通过凝胶柱的速度也不同凝胶是一种具有多孔,网状结构的分子筛.利用这种凝胶分子筛对大小,形状不同的分子进行层析分离,称凝胶层析.凝胶层析的应用范围:凝胶层析法适用于分离和提纯蛋白
其基本原理是利用被分离物质分子大小不同及固定相(凝胶)具有分子筛的特点,将被分离物质各成分按分子大小分开,达到分离的目的.
您要这道其中的原理就理解了.凝胶过滤时小分子进入凝胶的孔隙,大分子则直接洗脱,所以大分子先出来.电泳是利用蛋白质带电荷受到电场力和凝胶阻滞的作用,大分子当然跑得慢了.这两种胶是完全不同的,虽然中文翻译
两种方法原理不同,有差异是正常的.如果差距较大,要仔细分析.一般凝胶层析是非变性的,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳是变性的,二硫键也被还原,所以是亚基(肽链)分子量.凝胶层析与分子形状有关,一般marke
你的操作都是按说明书上来的吗?主要看你的泵设定流速啊,只要安装时密封性没问题就没关系.我也做凝胶柱层析的,有空可以多交流一下.
就是用于填装色谱柱的凝胶填料,除了那些葡聚糖之类的,能够耐压的凝胶,新型的
固定相为极性基团,氰基、氨基及双羟基三种.流动相为非极性或极性较小的溶剂.极性小的组份先出峰,极性大的后出峰,这称为正相层析法,适用于分离极性化合物.固定相为非极性基团,如十八烷基(C18)、辛烷基(
不知道你用的是什么柱子.如果是带转接头的柱子,漏水的原因可能是转接头的珐琅没有拧紧,或者是密封圈老化.另外一个原因是可能压力过大,超过了柱子的承受压力.建议你仔细检查,降低流速.
凝胶层析的原理是“分子筛”,凝胶是个多孔的介质,像个筛子,柱子越长筛相当于筛的次数越多.你可以多看看凝胶层析的原理,原理明白了自然就明白
凝胶过滤层析中每一个凝胶珠相当于一个分子筛,故小分子所经过的路径长,落在大分子后面;而凝胶电泳中整块胶板相当于一个分子筛,故大分子受到的阻力大而迁移慢,落在小分子后面.
首先琼脂糖凝胶可以排除,这是大孔凝胶,用于分子量较大的成分.我做分子筛用的比较多的柱子都是葡聚糖凝胶凝胶,我的蛋白比你的大,用G50和G100的填料,做的结果都没什么问题.你的蛋白7kD,如果没有什么