6*His标签表达的蛋白是多少
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/09/22 04:07:07
请给出相关的参考书籍!用GST标签把X蛋白结合到层析柱上,血清用这个柱子亲和层析.
ArecombinantproteincanbetaggedN-terminallyorC-ternimallywitha6XHistag.Thistagisbetterinprokaryoticsy
.等待高人回答txstbbm(站内联系TA)可能情况:1,ORF不完整或者不是预期的ORF,His没表达出来2,His被空间结构所掩盖,建议变性后再过柱cloudy3197(站内联系TA)同一ls,可
看你的flag抗体是否有问题,我是做抗体生产的,原来开发flag抗体时就会对其进行C端、N端、M端的Qc检测,正常情况下三端都需要有识别,我担心你的抗flag抗体有可能不识别N端,还有一种可能就是你的
用GST标签把X蛋白结合到层析柱上,血清用这个柱子亲和层析.
后者比较好,因为特异性强.SDS-PAGE是检测所有的蛋白,有可能你看见的一个条带不止一种蛋白(相同片段的多种蛋白).
用融合蛋白的tag做WesternBlotting,或者纯化后看融合蛋白的大小和预计的比较
为什么6X组氨酸与ATG中间有14个碱基?不是3的倍数?悲剧了.再问:是表达不会有his标签还是肯本就不能表达?再答:标签应该能表达出来,不过后面的序列全乱了,移码了,肯定不能用了
一般做包涵体复性,所用的变性剂是8M尿素和6M盐酸胍,是两个一起用的.只用一个有时候效果确实不怎么好.而且啊,在变性剂中,也是有部分蛋白不会溶的,所以多少都会有沉淀的.做包涵体复性很麻烦,我建议你试试
买进口的吧,反正我买国产的做的都很垃圾,要不杂不出来,要不就很淡
目的蛋白加上标签蛋白的总分子量,当然会有误差.像GST这种标签很大的,有30kd左右.而FLAG,HIS等都比较小.
你是如何知道那条非目的条带也带有组氨酸标签的呢?亲和层析和目的条带一起洗下来的吧?可能是组氨酸丰度较高的杂蛋白,也可能目的蛋白部分降解.要想获得较高纯度的蛋白仅仅用一步亲和层析很难达到.可能试试再加一
是这样的,his标签蛋白就是:六个组氨酸.一般存在于重组蛋白前面或后面,便于纯化该重组蛋白,组氨酸可以特异性的结合镍离子,带有组氨酸标签的重组蛋白可以被镍柱吸附,从而达到纯化的目的.也就是在表达载体上
当然是用PALL的IMACHyperCel金属亲和层析填料了.动态载量高,而且是一次离子螯合操作,多次稳定的纯化.价格也便宜,目前还在搞买一送一的活动.
看起来是构象不正确,可能是折叠或修饰的问题.如果只要求可溶,纯化后稀释一下,也许就不沉淀了.也可以试试加一些稳定剂,如甘油,DTT,分子伴侣等.如果要正确折叠的,就比较麻烦,可以用真核表达系统试试.T
his标签蛋白就是:六个组氨酸.一般存在于重组蛋白氮端或碳端,便于纯化该重组蛋白,组氨酸可以特异性的结合镍离子,带有组氨酸标签的重组蛋白可以被镍柱吸附,从而达到纯化的目的.也就是在表达载体上面,特别加
因为,纯化过程包括对大肠杆菌的裂解和对目标蛋白的纯化,经纯化后,大部分的杂质(杂蛋白、糖和核酸)都去除了,对ELISA的干扰小.如果不纯化,大肠杆菌本身是有众多生物分子的,这都是潜在的干扰性抗原.
你的蛋白表达的是可溶还是包涵体?再问:都有,用上清纯的,纯不出来,可能的原因是什么?
做个对比实验用不加不加目的蛋白多角体蛋白做个指纹然后一差减得到的就是目的蛋白的指纹