已知序列设计引物需要在序列前后预留序列吗-搜答案-大师作文网

直接发送给我,我帮你设计.

一般未知的序列旁边都有已知的一段吧,就是你说的“修饰片段”?PCR这种flankingsequence可以有很多方法,比如TAIL-PCR,用ADprimer（简并引物）和特异性引物就可以得到目标片段

从NCBI中下载基因的序列,再用DNASTAR进行比对,那是保守区域!

什么跟什么说的太不清楚饿了只要你需要的那段序列是对的不就行了嘛跟引物序列有啥关系毕竟大部分的PCR引物设计都是在需要的序列两端隔一段距离而且如果你测序是拿PCR引物测的话那前面的几十个碱基都是测不准的

mRNA序列从NCBI上搜如果是常规PCR引物用pp5设计realtime引物搜别人文献里面报道的实在没有再自己设计

你先设计几条引物,然后上NCBI数据库BLAST一下（在外显子上设计比较好些）再问：我的想法是先将已知的序列与同源物种比对，以同源物种多出的区域设计上下游引物，可是这样得到的引物分值太低，怎么办再答：

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/194473617?report=genbank

把这段基因输入设计软件里,调节引物位置,使变性温度在94度,退火温度=Tm-（5到10度）延伸温度72度左右,满足这些条件基本就可以了,当然还要根据实际情况多次实验得到最佳引物.如果你要扩增整个的基因

好像用这个软件设计引物的很少吧,我一般都用PrimerPremier5,或者oligo7.这种专业软件很多专业论坛都有说明书下载,比如生物秀、丁香通、生物谷什么的.

引物设计原则：1、长度：15—30bp,其有效长度[Ln=2(G十C)十(A十T)]一般不大于38,否则PCR的最适延伸温度会超过Taq酶的最佳作用温度(74度),从而降低产物的特异性.2、G十c含量

这问题都上百度知道来问了,你也是生物专业的研究生吧.PrimerPremier5这个软件设计引物用很不错的.

cDNA和mRNA的序列是互补的,如果用两个引物,最后的两条DNA序列分别对应于mRNA和cDNA中的一段.由于引物方向从5‘至3’,所以两个引物对应于mRNA和cDNA中相应序列即可.

首先请上NCBIBLAST搜索之(blastp).或许可以直接查到你研究物种的基因序列.即使没有,有近缘物种的基因序列也是个好的参考,通过比对,选择序列保守区设计引物.若搜索不到任何信息,就需要通过设

试试primer软件.

一般对于已知序列的PCR当然不要从保守序列来设计引物,只要从开放可读框前后开始设计就行了.需要从保守序列设计引物的情况一般是两种,一是某个物种里面某个特定基因序列从未被分离过,但其进化关系相近的物种有

提出了一种改良的TDT加尾克隆基因5对于基因组测序已经连接载体的PCR是利用已知基因组DNA序列设计的特异引物和载体通用引物进行扩增

PCR的目的是为了扩增目的基因小一点的基因可以直接合成但是大一点的基因就得用PCR扩增了引物是和目的基因的一端互补的单链DNADNN左边一个序列右边一个序列而且DNA的复制只能按照一个方向复制就是由3

根据cDNA序列设计就行了,不用加3‘utr,你做载体构建还是tr-pcr基因检测?再问：做rt-pcr检测。我们老板说要加上3‘utr的序列，不知道为什么？再答：不用加，我做rt-pcr检测那么多了

当然是dna的啦,引物的设计有很多需要注意的地方哦,不然怎么有primer5、oligo7之类设计引物软件呢.

那你就去找一段序列,在两边设计引物,在引物的5端挂上酶切位点序列,P完之后就能链接进去