怎样把含有质粒和重组质粒的受体细胞筛选出来
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/09/23 02:20:32
这叫克隆,看一下分子克隆的书吧
你需要的是理解:DNA是双链的吧.比如说左边一条是1的,右边的是2的.121212121212那么上下隔开1与1间就要用DNA聚合酶``连接单个链上的DNA片段左右1和2的就需要DNA连接酶```连接
一般有两种方法,一是用目的基因的特异性引物以重组质粒为模板,进行PCR扩增.看能否出现目的基因的扩增产物.还有一种是将纯化的质粒进行酶切,因为目的基因连接到载体质粒上时两边都带有人工添加的酶切位点,只
假设如果基因工程中的大肠杆菌自身含有质粒的话,那我们导入的质粒在纯化的过程中岂不是都将大肠杆菌本身的质粒都纯化出来了么?并且自身的质粒也会对我们导入的质粒产生干扰.不合逻辑.因此进行改造后的大肠杆菌是
分子水平上,用人工的方法提取(或者合成)不同的生物的遗传物质,在体外切割拼接和重新组合,然后通过不同方法把重组的DNA分子引入受体细胞,使外源DNA在受体细胞进行复制与表达,按人的需要生产不同的产物或
对呀如果将细胞涂在汗抗生素的板子上(或者培养基中),不含抗性基因的细胞就会被杀死,如果细胞成功的转染了质粒,得到了那个抗性基因,那么就不会被杀死,这个是最常用的筛选方法
如果是重组质粒的话,应该两种,正义基因表达载体和反义基因表达载体.再问:���������廹���������������ͷ��������������
你的质粒提出来以后没有经过线性化,因此存在三种形态,超螺旋,单链开环和线性分子,其中只有线性分子可以用maker判断分子量大小,另外两种不行,如果你的质粒提的质量好的话,应该是超螺旋占优势,超螺旋会比
细菌质粒上的目的基因不会转到受体细胞的DNA上,只能以质基因形式表达,如果要把目的基因转到受体细胞的DNA分子上,需要把目的基因导入逆转录病毒体内,通过逆转录,转到转到受体细胞的DNA分子上
我曾经做过这样的质粒:切除一个质粒中间的一段,然后将两端拼接起来.这个过程中我用了不同的内切酶.之后用PCR把粘性末端填上,成为平头末端.然后再用PCR,利用ligase将两端拼上.所以不是相同的内切
因为重组质粒上有抗生素抗性基因,然后如果导入成功的话,那么含有目的基因的细胞中也就有了抗生素抗性基因.比如说这个抗性基因是抗四环素基因,那么就把细胞放在含有四环素的培养基中培养.能够在其中存活的,就是
这个就要看标志基因是在细菌质粒上,还是在目的基因上了.可能不同的教材,是从不同的角度出发的.
重组质粒导入受体细胞应该仅限于导入过程,而后事如何就不管了.
现在的实验室使用的都是商品化的已经插入荧光蛋白的质粒载体,并且还做了增强,如绿色荧光蛋白pEGFP载体.你可以索要或者购买.如果想要自己构建,就需要设计一对引物,两端插入可以构建入载体的酶切位点,利用
你说的一点都没错.所以标记基因作用的另外一个说法更准确:“筛选含有目的基因的细胞”,当然这个筛选也只是初步筛选,要想确认是否含有目的基因,要用“DNA分子杂交技术”.
基因表达载体的构建(即目的基因与运载体结合)是实施基因工程的第二步,也是基因工程的核心. 将目的基因与运载体结合的过程,实际上是不同来源的DNA重新组合的过程.如果以质粒作为运载体, 首先要用一定
大肠杆菌的天然质粒有ColE1、RSF2124、pSC101.第一个质粒有大肠杆菌素E1合成基因;第二个是第一个的派生质粒,带有一个编码氨苄青霉素抗性基因的转位子;第三个有四环素抗性基因(手机字母不好
跑胶看大小啊,如果是转到了细菌中,就用目的基因的引物做PCR,能P出来的就是
细胞质中,为受体细胞核外的DNA片段.有性生殖产生的配子一定还有导入的目的基因,成功构建粒(含有GFP荧光标记)后转染细胞,检测目的基因mRNA显著表达增加,应用荧光双标记检测可发现:质粒转染成功(G
什么基因?什么质粒?正常情况不用这样做的一般做表达用的基因片段是需要测序鉴定的连T载体就是为了去测序,证实你扩增片段没有突变且是你需要的目的片段然后再去连接你的目的载体就ok了