AT含量高的PCR序列

一般未知的序列旁边都有已知的一段吧,就是你说的“修饰片段”?PCR这种flankingsequence可以有很多方法,比如TAIL-PCR,用ADprimer（简并引物）和特异性引物就可以得到目标片段

根本上说是已知核苷酸序列.如果序列知道了,它在什么基因上也就知道了（可以通过BLAST搜索的）.PCR的过程是这样的,你首先需要化学合成两条短的单链DNA序列,叫引物（可以直接叫一些公司帮你合成）,这

正向引物：5'CTTCGAAATTC反向引物：5'CCGATCGGGAGA(TCTCCCGATCGG的反向互补序列）当然,这对引物有些短,其实真正设计时上下游引物的序列中都可包含部分基因1的序列,以平

什么跟什么说的太不清楚饿了只要你需要的那段序列是对的不就行了嘛跟引物序列有啥关系毕竟大部分的PCR引物设计都是在需要的序列两端隔一段距离而且如果你测序是拿PCR引物测的话那前面的几十个碱基都是测不准的

mRNA序列从NCBI上搜如果是常规PCR引物用pp5设计realtime引物搜别人文献里面报道的实在没有再自己设计

你的序列AT含量很高,测序结果不好,所以我怀疑是你的片段里有polyA或者是polyT,一般超过7个以上的都会引起后续的测序乱峰,你的乱峰前边如果是一连串的A或者T的话,那就是这个原因,想要测好得靠运

PCR扩增一般只是扩增上下游两条引物之间的序列.不是.扩增一段序列,就是一段DNA双链,需要两条引物,分别和DNA双链的两条单链的3'端结合,然后扩增出两条引物间的序列.你需要详细了解下PCR的原理,

FPrimer:5'-TTGTAAAAAAATTAAATTAA-3'RPrimer:5'-CATATTTTAATTAATATTTC-3'你这个序列AT含量太高,尤其是5'端A有7个连续重复,引物本身很

试试吧.退火温度低一些50左右

把这段基因输入设计软件里,调节引物位置,使变性温度在94度,退火温度=Tm-（5到10度）延伸温度72度左右,满足这些条件基本就可以了,当然还要根据实际情况多次实验得到最佳引物.如果你要扩增整个的基因

好像用这个软件设计引物的很少吧,我一般都用PrimerPremier5,或者oligo7.这种专业软件很多专业论坛都有说明书下载,比如生物秀、丁香通、生物谷什么的.

前提：你的这条序列是5‘--3’的吧正向引物5‘--3’：TGCAACTACGTCCAC反向引物5‘--3’：TCGGACAAGACGTGC再问：能说说为什么吗？再答：DNA是双链的，引物结合于一条链

`````````````````````分给我吧,别浪费了

在pcr仪中进行它会经过加热退火加热过程完成一次链式反应,可以设定反应的次数.

很好理解啊.PCR产物就是一段核苷酸组成的双链.既然你能够把PCR做出来,那么这个基因想必你是有所了解的.此谓已知基因也.当然,你P出来的只是基因中的一小部分而已.

根据cDNA序列设计就行了,不用加3‘utr,你做载体构建还是tr-pcr基因检测?再问：做rt-pcr检测。我们老板说要加上3‘utr的序列，不知道为什么？再答：不用加，我做rt-pcr检测那么多了

当然是dna的啦,引物的设计有很多需要注意的地方哦,不然怎么有primer5、oligo7之类设计引物软件呢.

一般来说,RT-PCR的时候很多情况下会不知道模板DNA的序列,可以在Genbank中寻找和你要扩增的物种的亲缘关系较近的物种的同源基因,多找几种,用DNAMAN或其他软件可以比对它们的序列,这样可以

PCR是用来扩增目的片段的,可以富集你想要的片段然后用来测序或者克隆基因,可以在这个片段上做点突变,甚至可以用来测定目的片段在原始模版当中的丰度（包括有无）.cDNA除了进行PCR,也可以用来做cDN

我说说我的理解,仅供参考：你本来的意图,是通过载体线性化后,外源基因与基因组同源位点的双交换,将其整合入基因组中,对吗?如果说是整个环状质粒导入基因组,从理论上来说是有可能的,单酶切就可以了,而且概率