植物DNA提取中液氮的作业是什么
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/11/19 08:55:28
多放一点液氮,磨得时间适当长一些.如果你的样品比较多,在液氮还没有蒸发前迅速把粉末转移到EP官管中,然后把它暂时放到-20的冰箱中,等所有的样品全部磨好后统一加CTAB.你做实验的时候材料最好尽量新鲜
液氮只是为了便于破碎植物组织,没有也一样能提取DNA,毕竟加CTAB后还要65度水浴,分解得厉害的话就减少振荡,或增大CTAB用量,使DNA尽可能多地浸取出来.再问:那研磨的时候为了是它充分的研磨是要
通常采用机械研磨的方法破碎植物的组织和细胞,由于植物细胞匀浆含有多种酶类(尤其是氧化酶类)对DNA的抽提产生不利的影响,在抽提缓冲液中需加入抗氧化剂或强还原剂(如巯基乙醇)以降低这些酶类的活性.在液氮
经典的TRNzol法中有一步是加DNase的.这就是除DNA的一步.CTAB法中是加入LiCl这一步除去的DNA.氯化锂可以选择性沉淀RNA.
一般操作问题只会影响到浓度高低,如果根本没有,那可能试剂有问题,试剂配置?酸碱度?严格按照要求步骤来一遍.还有一步细节,分层后吸上清液时宁可少吸也不要吸到下层有机溶剂,否则Dna肯定没了
对样品进行急冻,使样品变硬,变脆,这样可以保证研磨的时候能够充分,均匀,DNA释放更充分.另外,提供一个相对低温的环境,对保证样品的稳定性也有帮助.
可以直接放入装有液氮的液氮罐里面啊,让叶子浸泡在液氮里面就可以了.植物叶子能经得住液氮那样超低温冷冻不,这个问题倒是要考虑.
种子类较难研磨,一般加液氮3次连续研磨,要保持样品冻结状态不能化冻,以免降解.研磨粗细程度一般应跟粗面粉差不多,无明显颗粒感即可,冻结状态研磨不会导致DNA降解.
抽提时应缓慢摇匀,不能太用力,时间要适当长一点.离心后吸取上清要慢,枪头最好用蓝枪头或是剪过的黄枪头,注意千万不能触到蛋白膜.原因就是DNA链容易断裂,所以要轻,要用口大的枪头.为了抽提效果好所以延长
可以通过测定它的浓度和OD值,还有办法就是点样和marker比较亮度.因为marker是知道浓度的.
1:低温导致植物组织冻裂,方便研磨使细胞破碎,使DNA释放完全2:低温情况下各酶处于低活性状态,有利于抑制DNAase的作用,保护DNA
下游做PCR的话,应该保证模板的纯度,CTAB法提取多半会得到浓度不错但纯度不够的DNA,建议将得到的DNA进行纯化,或者直接使用试剂盒提取,现在的国产试剂盒都还不错的,节约时间又不贵
从血液中
1)取材料,加液氮研磨成粉末状,迅速移入1.5mlEppendorf管中;(2)加入800μl的CTAB提取缓冲液,混匀(CTAB在65℃水浴预热),每5min轻轻震荡几次,20min后12000r/
加入LiCl这一步.氯化锂可以选择性沉淀RNA.
不加液氮也可以,前题是可以把材料研磨碎.我以前提DNA加液氮是要提二三十管时用的,液氮可以快速研磨材料.
不能直接加CTAB,只有充分研磨成干粉后在加CTAB,如果直接加CTAB,由于植物中水分和糖分多,成粘稠状不易被充分研磨.DNA也不能充分释放,还容易导致DNA断裂降解等.
看你的DNA用来干嘛了,如果要求不高可以不加再问:做普通PCR,我知道能提出DNA几乎就可以了,只是我想弄明白加BI这一步的作用,有劳赐教,谢谢。再答:你的bi全称是什么?
先将植物细胞用纤维素酶和果胶酶处理,得到没有细胞壁的原生质体,然后把原生质体放入蒸馏水中使其胀破,然后进行离心,分离出叶绿体(比较明显,一层绿色的),然后把分离得到的叶绿体打碎(用搅拌机),把打碎后的
真菌的细胞成分和植物是有差别的,这种专一性的植物DNA提取试剂盒不一定能提好真菌的DNA.如果有条件你最好是买专一性的真菌DNA提取试剂盒.不过植物DNA提取的CTAB法确实可以适用于真菌的DNA提取