目的基因转化大肠杆菌

一般目的基因导入的时候是靠质粒携带的,质粒上一般有抗生素抗性基因,所以质粒进去了,就有抗性了目的基因就进去了.

农杆茵介导转化法农杆菌是普遍存在于土壤中的一种革兰氏阴性细菌,分根瘤农杆菌和发根农杆菌两种,其细胞中分别含有Ti质粒和Ri质粒,其上有一段T-DNA,通过侵染植物伤口进入细胞后,可将T-DNA插入到植

已经得到扩增的目的基因片段和克隆载体→对两者分别进行酶切（选要相同的限制性内切酶对两者进行切割）→酶切产物经琼脂糖凝胶电泳回收→克隆载体和目的基因进行连接（一般选用T4连接酶）→大肠杆菌感受态细胞的制

含有抗生素的培养基不能检测目的基因是否成功表达,而是用来检测标记基因（也就是质粒）是否被导入到大肠杆菌中,如果大肠杆菌能成活,说明E.coli内含有标记基因,则说明质粒导入成功,也就自然说明了目的基因

3运载体自连的、目的基因片段自连的、运载体与目的基因片段相连的环状DNA分子

LB培养基胰蛋白胨(Tryptone)10g/L　　酵母提取物(Yeastextract)5g/L　　氯化钠(NaCl)10g/L琼脂粉15g/L作用：养细菌抗生素,Amp+Kan+什么的作用：做筛选

目的基因前段都会加上【 启动子】,以使该基因表达

农杆菌侵染双子叶植物是因为双子叶植物能产生一种吸引它的酚类化合物,而单子叶植物一般不能产生,所以农杆菌不侵染单子叶植物,所以将目的基因导入单子叶植物细胞不能用农杆菌转化法,如果单子叶植物也能产生这种酚

1、这是作为保藏的手段,不然你怎么保存你的基因?2、这是获得自引物之间完整序列的必要途径,因为测序是无法获得待测序列起始部分和约800-1000bps之后的序列,因此需要连接到质粒上测序,俗称TA克隆

合成的基因一般是放在质粒载体中的,只要有特异引物直接PCR扩增就可以了.不用导入Ecoli啊

这只能说是一种概率问题而已一般来说目的基因和标记基因都是被“捆绑”起来的但是他们互相脱落的概率是1%那么一般来说只要标记基因表达出来了那么目的基因就也是已经进入质粒里面了还有就是你下面那个问题一般这个

1.大肠杆菌中的目的基因不会跑到人体内.目的基因整合到大肠杆菌质粒后,就直接让它在大肠杆菌体内表达.大肠杆菌生长快,繁殖快,就可以产生大量的胰岛素.然后再从菌体细胞中提取胰岛素就OK了.2.基因工程,

没连进去呗可能是最初的PCR就没扩增出来你要的条带调整下退火温度或者直接连T载体测序或者换对引物再问：直接连T载体测序，这个怎么弄？引物是别人设计好的，所以很纠结。我们拿菌液提质粒有，只是不很多。再答

目的基因是利用重组质粒导入的,但大肠杆菌不一定会将它整合到自身基因中,目的基因有可能会丢失.所以质粒上需要含有标记基因,用标记基因来判断质粒有没有被整合,侧面反映目的基因有没有被整合.

重组质粒作为一个单独的质粒进入大肠杆菌发挥作用,不需要与ecoli体内原有的质粒结合……

质粒是细菌细胞内一种自我复制的环状双链DNA分子,能稳定地独立存在于染色体外,并传递到子代,一般不整合到宿主染色体上.现在常用的质粒大多数是经过改造或人工构建的,常含抗生素抗性基因,是重组DNA技术中

在体外构建基因表达载体主要是指将目的基因与载体（一般以质粒居多）连接,形成的重组DNA才能导入大肠杆菌,它能在大肠杆菌细胞内复制和表达.用Ca2+处理,我学的是用Ca2+处理大肠杆菌的细胞壁,增大细胞

因为你在用真核表达系统表达真核基因.对一些posttranslationalmodification,rarecodon等问题都能很好地解决

解题思路：农杆菌转化法解题过程：同学你好，请问你是遇到下面的这个题目了吗？如果不是的话，请在后面继续追加讨论。农杆菌转化法转移目的基因进入受体细胞后，目的基因插入的位置是A．Ti质粒上B．受体细胞染色

大肠杆菌表达效率远远高于其他真核细胞.