质粒DNA的转化实验中在含Amp的选择性培养基上实验组和阴性对照都没有菌落出现

质粒

非本人原创,转载自网络.认真看.质粒提取需要注意的提到了.溶液I,50mM葡萄糖/25mMTris-Cl/10mMEDTA,pH8.0；溶液II,0.2NNaOH/1%SDS；溶液III,3M醋酸钾/

一般有两种方法,一是用目的基因的特异性引物以重组质粒为模板,进行PCR扩增.看能否出现目的基因的扩增产物.还有一种是将纯化的质粒进行酶切,因为目的基因连接到载体质粒上时两边都带有人工添加的酶切位点,只

通过质粒遗传

DNA不溶于95%的酒精溶液,但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液.利用这一原理,可以进一步提取出含杂质较少的DNA.这里,用酒精可以洗脱在前几步实验中使DNA携带的盐离子

TE为含EDTA的Tris-HCl(PH8.0)缓冲液：其中比较关键的成分是EDTA,日常环境中不可避免的存在DNase,而DNase的活性依赖于钙离子,并能被镁离子或二价锰离子激活.镁离子存在条件下

首先要知道,质粒是共价,闭合,环状的DNA（cccDNA）.以常用的碱裂解法为例：当菌体在NaOH和SDS溶液中裂解时,蛋白质与DNA发生变性,当加入中和液后,质粒的cccDNA分子能够迅速复性,呈溶

细菌细胞内一种自我复制的环状双链DNA分子.能稳定地独立存在于染色体外,并传递到子代,一般不整合到宿主染色体上.应是非染色体DNA,即B一般质粒上都人工改造,植入目的基因启动子,和绿荧光蛋白(GFP)

阴性对照涂布的应该是没有转质粒的空菌吧?我觉得可能有三个原因：1,你的amp平板失活,可能是你加抗生素的时候培养基温度太高.如果这样,你的平板就相当于是无抗的.2,无菌操作失误,带入了其他有抗性的杂菌

用DNA水解酶处理从S型活细菌中提取的DNA,使DNA分解,就不能使R型细菌发生转化我们今天上课刚学的~你是高一的吧~

稍微讲的深一点吧,其实R型菌和S型菌都是同一种菌,在细菌的体内,一般是有一些核酸内切酶存在的,这些酶能够降解异源DNA,这是细菌进化出来防止病毒侵害的一种机制.而为什么这些酶不会切断自身的DNA呢,因

不是处理含目的基因的DNA的酶和处理质粒DNA的酶必须是同一种酶.这样才能使目的基因和质粒露出相同的粘性末端,目的基因和质粒才能被DNA连接酶连接起来.

用酚氯仿再次抽提.若对去除基因组DNA有要求,那么用核酸外切酶处理.再问：能不能再详细点？？？谢谢

在碱性环境中：染色体DNA氢键断裂,变性.质粒DNA：大部分氢键断裂,但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完全分离.在中性环境中：质粒DNA复性,溶于溶液中,染色体DNA不能复性,形成缠连的网状结构,

R型本身有自己的DNA,尽管一部分会整合S型的DNA,但是不会是全部.因为注入小鼠之后,R型和S型都有较适宜的生存环境,不会发生竞争.（如果S型的DNA量足够,仅仅在培养皿里混合后,等待一段时间会出现

供体菌相应位点的染色体没有交换到受体菌上,而且受体菌本身不能被该选择性培养基选择.你可以再做一组供体菌的对照试验,看看能不能生长.这种转化本身发生频率就很低,样本一定要多.

你用的是蓝白斑筛选,白斑为插入目的基因片段的转化子,蓝斑则没有,挑取白色单菌落摇菌进行pcr检测验证.百度蓝白斑筛选.

是目的基因这样才能说明你转化进去的是连了目的基因的质粒而不是自连的质粒.转化后挑菌摇菌后提了质粒才能测序,浓度才够再问：谢谢，在下是新手。再问一下：是连了目的基因的质粒还是单纯的目的基因呢？提质粒测序

影响转化效率的因素很多,主要有：感受态细胞制备的质量、受体菌生长期（大肠杆菌在对数生长期易产生感受态）、质粒的大小和构型、所用试剂的纯度、接种前菌种的保藏方式、冰浴时间（延长冰浴时间可略微提高转化率）

以东盛生物的为例bufferP1：除去RNAbufferP2：裂解细胞bufferP3：沉淀DNAbufferWA、bufferWB：都是洗涤液（这两个之间有什么区别我也不清楚）TE：溶解DNA.