p53基因rt-pcr引物
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/09/23 21:27:24
因为RT-PCR的模版是单链的RNA,一种引物就够了,而常规PCR的引物是双链DNA,需要上下游引物从两端同时扩增.
如果实验目的只是基因型鉴定,对PCR产物无其他要求的话,二聚体并非不能忍受,可以尝试以下方法优化反应条件:1.确定DNA模板为阳性,即确定含有目标序列;2.对退火温度设置温度梯度,琼脂糖电泳检测是否有
引物加的量应该相同,能放在一管里跑最好,但是分开跑也可以接收(一般都是这样)
上下引物的Tm最好相似,不能差异太大,不然不好设计退火温度;内参条带很亮,说明RT应该没多大问题,问题可能出现在PCR上.没有目的基因是因为1该基因确实不表达;2你的引物不特意,到NCBI的Prime
Oligodt不需要设计,用试剂盒里面的就行.如果你RT的引物想用自己的,那你需要扩增的基因序列应该是明确的吧.RT的时候'引物没太多的选择性,mRNA序列跟反义链配对,因此RT的引物要根据正义链(就
1.引物设计不够特异,检查你的序列,去BLAST看看.2.退火温度过低,检查你的引物的Tm,检查你的程序设置.
关键就是这个引物的设计,如果你能设计好并且成功RT-PCR,那就没问题了.
microRNA的茎环引物可以自己设计.据说有公司也可以帮忙合成,不过还是自己设计好了发过去比较省钱吧.内参一般是U6,因为它长度和microRNA一样比较短.我做的反转录内参是跟microRNA分开
你看,你分别获得了1-1200nt以及1000-1400nt这两段序列,那么中间有200bp长度的序列是重叠的,对吧?也就是说你已经从序列信息上获得了这个CD区所有的序列信息.如果你只是需要序列信息的
构建载体需要酶切的,所以需要加接头的!
引物本来就是单链的.书上画成双链才怪.PCR所用的DNA聚合酶只能顺着已经存在的一小段DNA的尾巴来接着合成,它不会自己起头.引物就是这么一小段用来起头的DNA.DNA本身很长很长,我们扩增时,只能扩
引物的功能是作为核苷酸聚合的起始点,引导DNA的合成.能设定循环次数,及控制复制次数.PCR循环次数主要取决于模板DNA的浓度.一般的循环次数选在30~40次之间,循环次数越多,非特异性产物的量亦随之
引物可以通过一些软件设计,比如primer5,但是还需要注意一些细节问题.比如1.引物最好在模板cDNA的保守区内设计.DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的.在NCBI上搜索不同物种的同
现在你到了基因序列的网站,最下面的那一大段就是外显子2到9的序列.一般设计RT-PCR引物需要跨外显子交界,这样可以提高特异性.你可以先拷贝外显子2的序列(216..289)atggaggagccgc
就是使用许多随机的碱基组合的引物(随机组合丰富),一般6到8个碱基,许多随机引物组成的一套引物组,由于mRNA相对较长,随即引物与它结合的位点较多,从而很快反转录形成cDNA单链.
首先,上下游引物20多个bp,4种碱基,想在基因组上找到2个一样的排列的情况是几乎不可能的事.所以,你只要确定了上下游引物,那么得到的就一定是你要的基因.其次,能问这个问题,说明lz对pcr的原理貌似
跟一般的PCR一样哇,PrimerPremier、Oligo都可以哦.
根据cDNA序列设计就行了,不用加3‘utr,你做载体构建还是tr-pcr基因检测?再问:做rt-pcr检测。我们老板说要加上3‘utr的序列,不知道为什么?再答:不用加,我做rt-pcr检测那么多了
那是显然的,所以在提rna做pcr的时候,如果里面混了基因组dna,那就有可能导致假阳性再问:谢谢,但是这不是我想要的答案。请问做半定量RT-PCR的引物怎么设计?可以设计在基因的非翻译区,然后扩非翻
建议到UCSCgenomebrowser上看,那里每个基因的extron用大写字母表示,而Intron用小写字母.比较直观.设计引物建议用软件,比较好的免费网页有Primer3.至少要有一个引物是跨i