大师作文网PCR引物二聚体很亮
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/11/10 07:58:37
同楼上,当初我问老师这个问题时,他说大学才学这么深
如果实验目的只是基因型鉴定,对PCR产物无其他要求的话,二聚体并非不能忍受,可以尝试以下方法优化反应条件：1.确定DNA模板为阳性,即确定含有目标序列；2.对退火温度设置温度梯度,琼脂糖电泳检测是否有
引物3'端末端有互补序列,这样造成引物以引物为模板进行延伸,造成引物二聚体.
在聚合作用的起始时,可以刺激合成另一种大分子,并与反应物以共价键形式连接的序列.在核酸化学中,引物是一段短的单链RNA或DNA片段,可结合在核酸链上与之互补的区域,其功能是作为核苷酸聚合作用的起始点,
用PP5.0或oligo软件.网上有很多说明书的,操作十分简单再问：等于白说
关键就是这个引物的设计,如果你能设计好并且成功RT-PCR,那就没问题了.
最好不要有引物二聚体的产生
一般要20个碱基的长度,一对,要防止形成发夹.
反转录失败或者RNA质量不好再问：有没有可能是引物的设计不好？（引物二聚体的范围是在100bp左右）如果是cDNA反转录不好，该如何检测呢？谢谢再答：有可能是引物的问题；在P目的基因的时候，建议你同时
随机引物PCR如果是RAPD的话,是要用单引物的一般是10bp大小的,CG含量要高于60%.
用primerpremie
你要重新设计引物了有引物2具体有好几个峰,谁也不知道是哪个,是产物的话主要看溶解温度,溶解温度高一般是产物.建议重新设计引物,重做梯度PRC电泳分析.再问：懒得做电泳了，引物是没有问题的，因为是参考文
没事,这个可以,你应该是把设计的上下游引物都进行了比对,前两个比对结果应该就是上游、和下游引物,假设你第一个结果是上游,第二个结果是下游.那么第三个结果也就是下游比对结果,下游结合的位置距离上游、下游
引物重新设计.还有一个方法,就是回收目的条带,然后用回收后的产物为模板,再次扩增.
这个不好说：一般引物二聚体小于150BP.条带模糊、条带宽、跑的比较快在溴酚蓝前面.你可以跑胶过程总观察一下.如果不是可能为非特异性扩增.您片段要是比较短建议您克隆后测序效果比较好.再问：电泳结束后，
我之前跑PCR也是1···我个人觉得你应该先从引物考虑虽然PCR受很多因素的影响但是引物和退火温度无疑是很重要的两个方面没出现引物二聚体只能说你设计的两端的引物没有错配啊等等你可以找有经验的师兄师姐帮
一.引物设计和样品使用均是一样的情况,就是反应条件的问题二.反应条件就看你的实验操作和所使用的仪器,操作都一样的话,仪器设定上出问题的可能性会大一些,其中退货温度是比较关键的三.人品问题也会导致这样的
看产生二聚体的位置,再修改相应部分碱基..
产生大量引物二聚体,一般pcr要求模板量不能过大,引物好像问题不是很大
引物二聚体跑的最快,速度超过了loadingbuffer指示剂.二聚体条带弥散,若你的目的片段和此片段有差距,基本可断定此为二聚体