PCR电泳有弥散的拖带
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/10/11 12:30:17
1、PCR体系中存在污染2、电泳槽中电泳缓冲液不净3、电压不稳定4、如果PCR的模板是经过酒精提取的质粒等相关DNA,则酒精没有除净5、退火时间过长或过短,延伸时间过短等以上是条带与你所要的目的基因的
分子克隆上都是6X或10X的,你就按6X的配方换成11X的吧6x凝胶加样缓冲液0.25%(m/v)bromophenolblue0.25%(m/v)xylenexyanol40%(m/v)蔗糖水溶液或
常温干燥、将残留乙醇挥发完,加入0.3mlddH2O溶解DNA;可以立即用于PCR分析或放置-20℃保存.注意!不同生物(植物、动物、微生物)的基因组DNA的提取
两者原因,可能是PCR体系没设计好,或者是胶没制好,跑电泳时注意保持电流恒定再问:多谢指教!跑电泳时我用的是恒功率,这个影响会很大吗?最近在做SSR标记有点迷茫!
PCR产物纯化试剂盒去除的是PCR反应体系中的离子、dNTP、引物以及聚合酶,收集其中的DNA片段.这只适合于几乎没有非特异性条带的PCR产物的收集.如果你的PCR产物具有非特异性条带,那么一定需要使
问题很多啊.或者是你的PCR仪需要进行荧光校准(如果其他探针也没有信号的话),已经不能收集荧光信号了.或者是你的探针本身就有问题,合成的不好,信号很弱甚至没有信号.或者是你的探针存放时间太长,存放条件
弥散一般指微小粒子在材料微观组织中的分布弥散强化指一种通过在均匀材料中加入硬质颗粒的一种材料的强化手段
弥散的近义词弥漫散发扩散荡漾
阴性对照的作用就是来判断实验是否有污染的,如果PCR条带和阴性对照都弥散的话,原因应该是污染.污染一般有试剂的污染,也有可能是环境的污染.先说试剂的污染.你设置的阴性对照所用的每一种试剂都存在被污染的
主带显著的情况下,很可能是引物聚合体.如果没有出现显著的你想要的主带,则是非特异扩增产物.第一种情况没事不用理会,第二种情况需要筛查模版中与引物的非特异性互补区,重新设计引物,或者升高退火温度试试.
弥漫扩散
首先要看你的条带是否清晰,虽然亮度不够但是清晰度应该高,没有拖尾没有非特异条带和引物二聚体,如果以上都没有,仅仅是目标条带不够亮的话,我觉得你可以将25微升体积同比放大至50微升反应体系,相应的制胶的
对PCR产物进行电泳是为了观察多态性条带的情况;目的片段大小的bp是指核酸序列的长度有多少个碱基对组成.
“从头拖到尾,另外一对引物就能做出来”说明不是引物之间形成二聚体,而是第一对引物的设计有问题(特异性很差).如果一定要扩增那个区,建议引物的位置向两边放一放.如果你没有好的设计软件,建议到Primer
在电泳的时候加上DNA的分子量marker,一般16S的大小都是1.5kb吧(很久不做了,记不太清楚).如果有明显的目的条带而且大小也合适的话那就一般不会错,如果想要确定,可以将条带从胶中切下来,回收
非特异性扩增太多,建议稀释模板.提高退火温度,再试试.还有如果一次PCR产物也是如此,建议切胶回收与目的条带相近处的弥散带作为二次的模板.
退火温度较低导致的非特异性扩增是造成你遇到问题的原因.你可以通过TouchDownPCR或者梯度PCR摸索最佳退火温度后重新进行PCR.
弥漫、飘散不知行不行额·请原谅我的无理额·
我觉得主要是胶和电泳缓冲液的问题,Tris8.86.8浓度,pH是否正确.SDS的纯度可能也有关系.丙烯酰胺的浓度,交联度合适不合适.做胶的时候各种溶液是否加的正确,胶的浓度是否合适,电泳缓冲液的浓度
首先怀疑,特异性不好,解决办法:1,可能是模板量过高,降低模板浓度10-1000倍;2,适当提高退火温度1-3度,或者先用高于你以往退火温度的1-3度先p上5个循环,再用先前温度p剩余的循环(也就是在