序列连在T载体上,用sacⅡ单酶切之后目的条带没有了(t载体有),这是咋回事啊
来源:学生作业帮 编辑:大师作文网作业帮 分类:生物作业 时间:2024/10/04 07:24:54
序列连在T载体上,用sacⅡ单酶切之后目的条带没有了(t载体有),这是咋回事啊
序列两端都是sacⅡ酶切位点
序列两端都是sacⅡ酶切位点
将原题贴上,话说的不明不白,我有点无法理解.如果理论上:用用sacⅡ单酶后能出现你的目的条带,但实际上没有酶切出目的条带(t载体有),我认为原因是T载体自连,你的目的条带没有连上!建议重连,并用菌落PCR检验,然后用酶切检验.
再问: 是这样的,我的序列之前连在t载体上,序列长度1800bp,之前已经送过测序没问题的,现在我把连有目的序列的T载体当做质粒从菌体中提了出来,然后做单酶切,因为我的序列两端都带有sacⅡ酶切位点,所以我用sacⅡ对这一质粒进行单酶切,酶切之后发现只有在2700bp左右有很明显的一条带,很明显这是T载体的,而我的目的条带缺不见了。阳性对照为未进行酶切的质粒,可以在4500bp位置看到,说明我的质粒确实带有目的片段的
再问: 是这样的,我的序列之前连在t载体上,序列长度1800bp,之前已经送过测序没问题的,现在我把连有目的序列的T载体当做质粒从菌体中提了出来,然后做单酶切,因为我的序列两端都带有sacⅡ酶切位点,所以我用sacⅡ对这一质粒进行单酶切,酶切之后发现只有在2700bp左右有很明显的一条带,很明显这是T载体的,而我的目的条带缺不见了。阳性对照为未进行酶切的质粒,可以在4500bp位置看到,说明我的质粒确实带有目的片段的
我的目的片段连载体后,挑单克隆摇菌,用菌液PCR,没有条带.
连接到T载体上面后,做双酶切,条带不正确,目的片段变大是什么原因
pGEM easy-T载体上用的M13引物序列是什么?
我已经有含有目的基因的T质粒了,怎样构建表达载体啊?
关于t载体基因工程中常提到t载体(t-Vector),请问什么是t载体,t载体有什么作用
TAKARA的PMD18-T载体可以用哪个通用引物验证?用了TAKARA的PMD18-T载体转入了目的片段,想用PCR验
有没有人反向PCR以后,连到载体上,测序发现:只有引物正确,其它的都不是目的序列
在做载体构建的时候,PCR时有目的条带,但是摇菌酶切没有东西,请问是怎么回事啊?
用同种限制酶切质粒和目的基因DNA,连接后,产生的载体-载体连接物不是也有标记基因而且在培养基上生长吗
我构建的穿梭载体,连接好后进行双酶切和PCR两个途径的检测,结果酶切没有条带显示,而PCR确有目的条带!
T载体克隆为什么要用cDNA
怎么单酶切,单酶切后 怎么把目的基因连到已经酶切过的载体上 如何防止自连