碱裂解法提取质粒DNA的电泳图谱,为何我的只有两条带?分别都是什么?
来源:学生作业帮 编辑:大师作文网作业帮 分类:生物作业 时间:2024/09/24 03:24:15
碱裂解法提取质粒DNA的电泳图谱,为何我的只有两条带?分别都是什么?
1.我的Marker 选的100bp 是不是不合适?
2.这两条带是线性和开环构型DNA?这两条带哪个是线性哪个开环构型DNA?超螺旋的为什么没有?
1.我的Marker 选的100bp 是不是不合适?
2.这两条带是线性和开环构型DNA?这两条带哪个是线性哪个开环构型DNA?超螺旋的为什么没有?
1)选择分子量 跟你的质粒接近的marker,最理想的是包含质粒分子量在内,但据我所知没有这样的marker.
2)你这个电泳图上样量太大了,一方面条带不整齐难以判断,另一方面你干嘛要纠结于几条带呢?一般说是3条带也是理论上的,但实际上,在菌体内复制的质粒就是一个连续的状态,什么样都有,电泳结果就可能造成条带的局部涂布.
所谓的三条带解释没有定论,现在一般认为是超螺旋、复制型(处于复制的半开环状态,即眼结构)和开环DNA(一条链断了),早先认为的 线状DNA后来被否,因为质粒很不容易断裂成线状的.顺序应该是超螺旋在最前边,开环在后边.
凭经验,我估计你的超螺旋和复制型合并成你那个粗的涂抹带了,后边那个细的是少量的开环DNA.
2)你这个电泳图上样量太大了,一方面条带不整齐难以判断,另一方面你干嘛要纠结于几条带呢?一般说是3条带也是理论上的,但实际上,在菌体内复制的质粒就是一个连续的状态,什么样都有,电泳结果就可能造成条带的局部涂布.
所谓的三条带解释没有定论,现在一般认为是超螺旋、复制型(处于复制的半开环状态,即眼结构)和开环DNA(一条链断了),早先认为的 线状DNA后来被否,因为质粒很不容易断裂成线状的.顺序应该是超螺旋在最前边,开环在后边.
凭经验,我估计你的超螺旋和复制型合并成你那个粗的涂抹带了,后边那个细的是少量的开环DNA.
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