大师作文网利用吸附柱纯化DNA的原理是什么?
来源：学生作业帮 编辑：大师作文网作业帮 分类：生物作业 时间：2024/11/13 20:15:41
利用吸附柱纯化DNA的原理是什么?
看了楼上一些回答,也是学生命类的吧?
专一性的吸附柱用的是和基因探针一样的原理,人工合成待纯化的DNA的一端一定长度序列的反义链,并加到吸附柱上,当混合物经过时,需要分离的DNA分子与柱上的探针结合,被留下,其余的通过.
这样的离心吸附柱可以高效、专一地与DNA片段结合,同时最大限度除去蛋白质、离子及引物小片段等杂质.
这样将寡核苷酸片断结合到柱上,可回收50 bp-50 kb DNA片段.适用于 DNA溶液中只有单一DNA片段或溶液中所有DNA片段都需同时回收的情况.
非专一性的和楼上说的差不多.
纯化柱是表面偶联有二乙胺乙醇(DEAE)的亲水性树脂.DNA纯化原理为DNA磷酸基带负电荷,DEAE带正电荷,DNA可以在0.1.4 mol．L-1的相当大的盐浓度范围内仍与DEAE 结合,当低盐QBT溶液平衡纯化柱后,即可加样,用中等盐浓度的QC洗去RNA和其他杂质,最后用高盐浓度的QF将DNA洗脱下来.
由于传统的离子交换范围仅在0.4 mol．L-1以内,使杂质和DNA 洗脱范围十分接近,难于达到满意的纯化效果.但该柱一经使用,6h后纯化效力即开始下降.估计可能得原因有二,一是树脂表面亲水性强,极易吸附蛋白,糖类,RNA等水容物,从而使原装柱经几次循环后吸附过多杂质,影响了DEAE吸附DNA的能力,同时杂质阻塞树脂间隙,使液体流过柱子的速度明显变慢,二是DEAE与树脂的偶联并不十分稳定,在一经使用后的液体环境中,容易逐步解离.
专一性的吸附柱用的是和基因探针一样的原理,人工合成待纯化的DNA的一端一定长度序列的反义链,并加到吸附柱上,当混合物经过时,需要分离的DNA分子与柱上的探针结合,被留下,其余的通过.
这样的离心吸附柱可以高效、专一地与DNA片段结合,同时最大限度除去蛋白质、离子及引物小片段等杂质.
这样将寡核苷酸片断结合到柱上,可回收50 bp-50 kb DNA片段.适用于 DNA溶液中只有单一DNA片段或溶液中所有DNA片段都需同时回收的情况.
非专一性的和楼上说的差不多.
纯化柱是表面偶联有二乙胺乙醇(DEAE)的亲水性树脂.DNA纯化原理为DNA磷酸基带负电荷,DEAE带正电荷,DNA可以在0.1.4 mol．L-1的相当大的盐浓度范围内仍与DEAE 结合,当低盐QBT溶液平衡纯化柱后,即可加样,用中等盐浓度的QC洗去RNA和其他杂质,最后用高盐浓度的QF将DNA洗脱下来.
由于传统的离子交换范围仅在0.4 mol．L-1以内,使杂质和DNA 洗脱范围十分接近,难于达到满意的纯化效果.但该柱一经使用,6h后纯化效力即开始下降.估计可能得原因有二,一是树脂表面亲水性强,极易吸附蛋白,糖类,RNA等水容物,从而使原装柱经几次循环后吸附过多杂质,影响了DEAE吸附DNA的能力,同时杂质阻塞树脂间隙,使液体流过柱子的速度明显变慢,二是DEAE与树脂的偶联并不十分稳定,在一经使用后的液体环境中,容易逐步解离.