什么是“组织化学”

什么是“组织化学”

组织化学是指以常用的组织化学技术,对细胞内主要化学成分和活性的粗略(一般性)的研究.
概要介绍如下:
一,______ 核酸(DNA和RNA)
(一)__ 化学特性
1.分布: DNA (细胞核内)
RNA(核仁10% ;细胞质-核糖体90%)
2. 分子结构:戊糖 + 磷酸 + 碱基
特点:① 大量的磷酸基团→酸性
(嗜碱性的基础)
② 戊糖—被盐酸水解→醛基
(成为Feulgen法显示核酸的基础)
② 戊糖—被盐酸水解→醛基 (成为Feulgen法显示核酸的基础)
③ 可以完全水解或部分水解
④ 可以用RNAase或DNAase消化
[ 对照实验(—)]
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(一)__ 显示方法
1. 福尔根(Feulgen)反应显示DNA
[ 原理 ] 在60℃温度下,将DNA用1N盐酸水解,DNA双链打开成单链,先释出碱基,然后脱氧核糖释出醛基,该醛基与Schiff氏液形成紫红色沉淀.
[ Schiff试剂显色原理 ]
碱性品红 亚硫酸 → 白亚黄酸
(无色试剂,称为Schiff试剂)
[方法]
固定剂的选择可用一般的组织学固定液,常
用Carnoy固定液.
Carnoy固定液:
纯酒: 氯仿: 冰醋酸 = 6:3:1
(60ml) (30ml) (10ml)
恒冷箱切片机的具体染色步骤如下:
⑴ 切片固定在冰醋酸与纯乙醇(1:3 V/V)
中10分钟.
⑵ 由乙醇降至蒸馏水中.
⑶ 用1N盐酸浸泡.
⑷ 放入预热到60℃的1N盐酸中,留6分钟.
⑸ 放入室温的1N盐酸中.
⑹ 放入Schiff液试剂,保持在暗处,60分钟
⑺ 用新配制的SO2水浸洗3次(脱掉未反应
的Schiff液).
⑻ 蒸馏水浸洗净(必须用蒸馏水→洗净无色品红,
否则,残留试剂→有色品红).
⑼ 脱水透明,封固.
结果:核内DNA染为红紫色.
对照:仅改变第4步为1N盐酸,室温15分钟→(-).
[ 注意事项 ]
⑴ 不用醛类固定剂如Bouin,戊二醛,丙烯醛等.
常用Carnoy液,甲醇等.
⑵ 控制水解时间,不同的固定剂用不同的时间,
如:Carnoy 8分钟;Genker 5分钟;
Susa 18分钟 ★ 最适条件应自行试验.
⑶ 控制温度,一般1N盐酸60℃;
如果5N盐酸18～25度.
⑷ 保证Schiff试剂的纯净度.
⑸ SO2要新配制,除去多余的 Schiff液宜用之.
⑹ 必须对照.
2._ 显示核酸的其它方法
⑴ Kurnick甲绿Methylgreen显示DNA法
⑵ 甲绿派若宁Methy green-Pyronin显示DNA和
RNA法
⑶ 菊花青铬明矾(GC)显示核酸法
⑷ 丫啶橙Acridine Orange显示DNA和RNA法
⑸ 核酸提取法
_一,______ 蛋白质(Protein)
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(一)蛋白质的分子结构
蛋白质的基本单位是氨基酸,肽键将不同的氨基酸结合在一起,除氨基和羧基之外,还含有其它基团,如:—羟基,硫氢基,二硫基等.依其结构特点可分为:酸性氨基酸 和碱性氨基酸 ;芳香族氨基酸:苯丙氨基酸,酪氨基酸;杂环类氨基酸:组氨基酸,色氨基酸,亚氨基酸,脯氨基酸,羟脯氨基酸.
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(二)目前应用
1._ 用于蛋白质的一般定性
① 确定是否为蛋白质
② 确定蛋白质的酸碱性
③ 显示蛋白质的特殊基团
2._ 用于蛋白质功能定性和定位
_(三)染色方法
目前,研究蛋白质功能定性和定位时多用酶
组织化学法,配体—受体结合法,免疫组化法以
显示特殊的蛋白质.这里仅介绍一般的染色方法.
1.四氮化联邻茴香胺法
(Tetra-azotized-o-anisidine)
[ 应用 ] 广泛应用于显示酶的活性
[ 原理 ] 芳香伯胺与亚硝酸作用,在低温下(