求写出降解三唑磷（农药)微生物培养筛选实验步骤?要用到1.富集培养2.功能验证3.平板分离4.筛选后功能验证

来源：学生作业帮编辑：大师作文网作业帮分类：生物作业时间：2024/11/12 07:31:29

先查询三唑磷的相关知识,为设计筛选条件提供理论依据.
化学品中文名称：三唑磷
化学品英文名称：triazophos
中文名称2：三唑硫磷
英文名称2：hostathion
技术说明书编码：2745
CAS No.：24017-47-8
分子式：C12H16N3O3PS
分子量：313.34
从其分子式可以看出,该物质分子中含有：碳、氮、磷、硫等营养元素,因此,设计使用以三唑磷为唯一碳源（或者唯一氮源、唯一磷源均可）的培养基,浓度梯度要适宜,同时加入痕量生长因子（酵母膏或玉米浆,含量不超过0.1%）进行富集和选择培养.
这一步是实验设计的关键.
1、富集培养
从富含三唑磷农药的环境(常用三唑磷的农田、三唑磷生产企业的废水处理池及周边土壤等地)中采集土壤样品或水样,加入以三唑磷为唯一碳源的液体培养基中,适宜温度下摇床振荡培养或者静置培养,连续观察,待其有明显菌体生长之后进入下一步实验.
2、功能验证
将上述样品取样测定其三唑磷含量的变化,如果出现显著下降,即意味着样品中存在能够降解三唑磷的微生物,既可进入下一步筛选环节.
3、平板分离
将富集培养的样品,采用平板划线、点种、涂布等方法,接种在筛选培养基（同样是以三唑磷为唯一碳源、或氮源、或磷源）上,能在上面生长的微生物即为能够利用、降解转化三唑磷的目标菌株.
一般可以根据菌落大小、菌落生长速度以及是否出现水解圈、水解圈的大小等进行初步判定其降解三唑磷能力的有无和大小.
采用平板划线、涂布等分离纯化方法,获得单菌落,经反复传代（在筛选培养基上）,确定为形态一致的纯菌之后,可进行分类鉴定,一般方法程序是：形态鉴定、分子鉴定及理化鉴定等多相分类法.
4、筛选后功能验证
对已获得的纯菌,即可进行针对性的功能验证.
即采用以三唑磷为唯一碳源（或氮源、磷源）的培养基,进行纯菌发酵,采用化学分析（液相色谱?）监测三唑磷含量的变化,即可对该菌的降解能力进行验证和评价.
需要的话,还可以进一步分析其降解途径、降解关键酶、降解酶基因等工作.

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