请问各位朋友,pcr产物条带很淡,是什么原因?有哪些好的改良方法?
来源:学生作业帮 编辑:大师作文网作业帮 分类:综合作业 时间:2024/10/05 10:28:41
请问各位朋友,pcr产物条带很淡,是什么原因?有哪些好的改良方法?
引物、模板没问题的话,就加cycle,多扩几轮,就亮了.(一般pcr酶和buffer是没有问题的,除非你反复冻融或者长时间放置室温)如果上一轮扩出来特异性好的话,可以适当降低退火温度.
多扩了几轮,退火温度也降低了,但是条带仍然很淡,这时候,基本上就是引物和模板的问题了.你要好好看看引物特异性好不好,dimer亮不亮,(自身发夹一般不会有太大影响);模板的话,要看看GC含量高不高,模板质量好不好.引物不好只能重新设计.模板不好可以加点DMSO(GC含量高),或者重新提取.差不多就这几个方面吧~
再问: 谢谢您这些宝贵意见与建议
多扩了几轮,退火温度也降低了,但是条带仍然很淡,这时候,基本上就是引物和模板的问题了.你要好好看看引物特异性好不好,dimer亮不亮,(自身发夹一般不会有太大影响);模板的话,要看看GC含量高不高,模板质量好不好.引物不好只能重新设计.模板不好可以加点DMSO(GC含量高),或者重新提取.差不多就这几个方面吧~
再问: 谢谢您这些宝贵意见与建议
PCR产物电泳检测结果点样孔很亮,没有目的条带.是什么原因?marker的条带正常.
基因组PCR扩增条带很宽可能的是什么原因?有哪些可以解决的方案?(连续几次实验做出来的条带都比较宽)
在做荧光定量PCR时,PCR仪检测不到荧光信号,但是产物用琼脂糖电泳后有清晰的目的条带,请问这是为什么?
请问PCR过程中目的条带不够亮,是什么原因造成的?应如何解决?
组织提取的cDNA和细胞提取的cDNA用同一引物PCR扩增出来的条带长度不一样,是什么原因?有什么方法改进吗
PCR条件优化请问高手PCR产物目的条带以下有杂带,PCR条件该如何优化?
pcr电泳出现模糊团状条带是什么原因造成的
我的PCR条带弥散,阴性对照也弥散,但是不加引物不弥散,当然也没有条带,请问都是什么原因啊?
PCR产物的电泳条带不够亮,为何?如何优化PCR反应体系
我构建的穿梭载体,连接好后进行双酶切和PCR两个途径的检测,结果酶切没有条带显示,而PCR确有目的条带!
RT PCR只跑出内参的条带,没有目的基因,原因有哪些?
PCR跑出来的条带比较弥散,主要有哪些原因啊?