质粒酶切后,目的片段DNA是小片段,琼脂糖电泳图目的条带太暗,怎么增加亮度?
来源:学生作业帮 编辑:大师作文网作业帮 分类:生物作业 时间:2024/10/09 21:23:48
质粒酶切后,目的片段DNA是小片段,琼脂糖电泳图目的条带太暗,怎么增加亮度?
我的目的条带在200bp左右,酶切跑胶,能看见目的条带,但是太暗了,怎么能够增加亮度啊?
补充:我用的琼脂糖凝胶浓度是1.5%,酶切体系是20uL,上样量也是20ul,工作液中的EB浓度是0.6%.
怎么改进实验啊?
是目的条带太暗(小片段),切开的大片段挺亮的,而且加了质粒对照了,质粒也比较亮(加了3ul)
我的目的条带在200bp左右,酶切跑胶,能看见目的条带,但是太暗了,怎么能够增加亮度啊?
补充:我用的琼脂糖凝胶浓度是1.5%,酶切体系是20uL,上样量也是20ul,工作液中的EB浓度是0.6%.
怎么改进实验啊?
是目的条带太暗(小片段),切开的大片段挺亮的,而且加了质粒对照了,质粒也比较亮(加了3ul)
你没怎么说清楚.首先,是大片段和小片段(目的条带)都暗,还是只有小片段暗?如果都很暗,可能是酶切体系中的质粒加的不够多,或者是你提取的质粒浓度不高.如果是只有小片段很暗,那就说明内切酶没把质粒切开,你要注意一下内切酶的活性或浓度、温度、离子等对酶活是否有影响.
1、3ul的质粒感觉有点少,你是割胶回收的吗?那质粒量要多加,因为回收会损失片段的.
2、有质粒的存在就是说明还没切开.你的酶有问题吗?酶切体系的buffer浓度、温度什么的对不?酶切多少时间?另外,还要看你选择的酶切位点好不好切啦,有些酶切位点很难切开的.
1、3ul的质粒感觉有点少,你是割胶回收的吗?那质粒量要多加,因为回收会损失片段的.
2、有质粒的存在就是说明还没切开.你的酶有问题吗?酶切体系的buffer浓度、温度什么的对不?酶切多少时间?另外,还要看你选择的酶切位点好不好切啦,有些酶切位点很难切开的.
请问跑琼脂糖凝胶电泳时内参β-actin条带的亮度一定比目的基因条带亮吗?
在做荧光定量PCR时,PCR仪检测不到荧光信号,但是产物用琼脂糖电泳后有清晰的目的条带,请问这是为什么?
琼脂糖凝胶电泳双酶切为什么没有目的基因条带
DNA琼脂糖凝胶电泳图谱怎么分下?从右向左分别为 大肠杆菌质粒DNA电泳图谱、链霉菌总DNA电泳图谱、Mark
PCR电泳目的条带很浅
DNA胶回收电泳有目的条带,但是测OD值时去测不出来?请问这究竟是什么原因?
提出来的RNA 电泳检测时没有条带 用的是1%琼脂糖电泳
用RT-PCR检测目的基因表达差异,需将内参基因的电泳条带亮度调成一致.
求高手帮忙分析一下这俩个电泳图里的条带(第一个是DNA,第二个图是质粒)越详细越好,
PCR扩增目的基因以后,怎么用琼脂糖电泳回收及纯化呢?希望高手指教!
下图是细菌DNA和质粒的电泳图,marker很正常,dna和质粒作为太严重了.麻烦哪位大仙帮分析一下,谢谢!
做琼脂糖凝胶电泳时,怎样使目的条带更清晰?