DNA的限制性内切酶酶切和鉴定的原理

来源：学生作业帮编辑：大师作文网作业帮分类：生物作业时间：2024/11/11 16:12:52

DNA的限制性内切酶酶切和鉴定的原理

原理:限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上,并切割双链DNA.它可分为三类:Ⅰ类和Ⅲ类酶在同一蛋白质分子中兼有切割和修饰(甲基化)作用且依赖于ATP的存在.Ⅰ类酶结合于识别位点并随机的切割识别位点不远处的DNA,而Ⅲ类酶在识别位点上切割DNA分子,然后从底物上解离.Ⅱ类由两种酶组成:一种为限制性内切核酸酶(限制酶),它切割某一特异的核苷酸序列; 另一种为独立的甲基化酶,它修饰同一识别序列.Ⅱ类中的限制性内切酶在分子克隆中得到了广泛应用,它们是重组DNA的基础.绝大多数Ⅱ类限制酶识别长度为4至6个核苷酸的回文对称特异核苷酸序列(如EcoRⅠ识别六个核苷酸序列:5'- G↓AATTC-3'),有少数酶识别更长的序列或简并序列.Ⅱ类酶切割位点在识别序列中,有的在对称轴处切割,产生平末端的DNA片段(如SmaⅠ:5'-CCC↓GGG-3');有的切割位点在对称轴一侧,产生带有单链突出末端的DNA片段称粘性未端,如EcoRⅠ切割识别序列后产生两个互补的粘性末端.
5'…G↓AATTC…3' →5'… G AATTC…3'
3'…CTTAA↑G …5' →3'… CTTAA G…5'
鉴定:利用电泳来鉴定利用切过了的DNA片段大小不一所跑出的条带远近不同来鉴定是否剪切成功

甲基绿和吡罗红在鉴定DNA ,RNA的显色原理. DNA鉴定的步骤限制性内切酶和DNA连接酶的作用机制是什么 DNA鉴定技术DNA鉴定在法医鉴定和亲子鉴定中的应用.具体鉴定步骤如何?使用的鉴定技术是什么?用的DNA模板是什么?PC 动物DNA鉴定的条件? 关于DNA的粗提取和鉴定的问题 DNA粗提取和鉴定的实验问题快速鉴定RNA和DNA的方法是什么? 一个DNA粗提取和鉴定的实验问题限制性内切酶和DNA连接酶可分别对不同DNA进行特定位点的剪切和连接是否正确简述限制性核酸内切酶和DNA连接酶的发现对基因工程的诞生有什么意义一般采用同一种限制性核酸内切酶分别处理质粒和含有目的基因的DNA