DNA酶切之后,产物直接电泳,胶回收之后的产物中酶还有活性吗?

来源：学生作业帮编辑：大师作文网作业帮分类：生物作业时间：2024/09/29 12:32:47

DNA酶切之后,产物直接电泳,胶回收之后的产物中酶还有活性吗?
没有用EDTA终止反应,电泳和胶回收会使酶失活吗?现在取胶回收产物进行连接转化,转化效率底,平板上未见菌落.怀疑是胶回收的载体中还有酶的活性

你做胶回收的那个柱子,只吸附DNA,就算有蛋白和其他杂质也在胶回收步骤中洗掉了,转化效率低一般不会是这个原因.
你先看看这些步骤有没有需要优化：
1.连接体系：粘末端是否匹配,载体与片段的比例、多少,Buffer,酶量,等等,可以参照连接酶的说明书.
2.转化体系：连接产物不要超过感受态量的10%,加入时不要吹打.
3.如果是自制的感受态,看一下转化效率,是否反复冻融,或者在室温放置较长时间.实验操作是否遵守流程等等.
4.确认一遍载体的抗性和培养基的抗性.
再问：亲，如果酶切之后没有终止反应而直接电泳，在电泳时，酶切会继续吗？
再答：不会的，即使有，你也可以忽略不计。一般酶切反应不终止也没关系，而且酶切需要一定的缓冲液，不然活性就会大大下降，以至于失活。所以不要纠结酶切这个问题，问题肯定不在这里。

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