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已知我的蛋白质分子量很小,差不多在5KD以下,该怎样跑电泳啊?

来源:学生作业帮 编辑:大师作文网作业帮 分类:综合作业 时间:2024/10/03 19:23:09
已知我的蛋白质分子量很小,差不多在5KD以下,该怎样跑电泳啊?
已知我的蛋白质分子量很小,差不多在5KD以下,该怎样跑电泳啊?
不用配非常高浓度的胶.你可以做Tricine-PAGE,对于分离小肽非常有效.
再问: 如果不用Tricine-SDS-PAGE这种方法,还有其他方法吗?
再答: Tricine-PAGE是最适合的方法,你下游打算做什么实验?
再问: 主要是Tricine-PAGE比较麻烦,我从Thermo的网站上找到个关于小分子电泳的配方,比较简单,也做过几次,但是总是要出现溴酚蓝已经跑出去了,而样品才跑了一半。配方如下,分离胶:1.2ml乙二醇,3M tris-hcl PH8.45 1ml,40%丙烯酰胺1.8ml,40%AP4ul,Temed6ul.浓缩胶:3M tris-hcl PH8.45 0.5ml,40%丙烯酰胺250ul,RO水1.25,40%AP3ul,Temed8ul。还请帮忙分析一下。。。。
再答: 我想溴酚蓝跑出胶而你的样品还在胶里边儿影响不大,你无非是要目的带留下。你的意思是没有办法达到应有的分辨率吗?
再问: 因为样品中多数是20KD以下的蛋白,根本没怎么跑开,时间久了会跑弥散,还有我用的是200V恒压。
再答: 那你这个比较麻烦,选择小分子量的蛋白marker作为电泳参照确定电泳时间。另外样品可以做前处理,比如超滤一下,尽量减少其它蛋白对目的蛋白的干扰,这样结果会好一些。
再问: 点了marker的,5KD以下的也弥散了,也是只跑到了一半。
再答: 既然这种方法适用性不好为什么不考虑换用最稳妥的Tricine-PAGE呢?
再问: 因为我想搞懂这方法,看能不能进行优化。
再答: 从事生命科学研究没有什么比时间更宝贵的了。有成熟而又简单的方法你还是应该用,不然事后你一定会后悔的。
再问: 谢谢。。。
再答: 不用客气。
再问: 可以加您Q吗?以后可以多像您请教。
再答: 略知皮毛而已,何谈请教。倒是你自始至终都采用匿名的方式……