核酸探针加标记的作用
来源:学生作业帮 编辑:大师作文网作业帮 分类:生物作业 时间:2024/11/12 17:33:10
核酸探针加标记的作用
加标记的作用便于我们发现,
生物样品往往是非常复杂的生物分子混合体,除少数特殊样品外,一般不能直接与芯片反应,必须将样品进行生物处理.
首先,必须把我们所需要的细胞、颗粒从混和细胞中分离出来.现在主要利用电场作用来分离细胞、细菌及颗粒(包括富集病毒以及破碎细胞使核酸和蛋白质释放出来).其中比较成熟的分离方法有介电电泳.其原理是:在不均匀的变换频率(在10~100kHz范围内)的交流电场中,不同细胞或颗粒由于介电性质不同而在交变电场中形成流过速度的差别,使某一类细胞或细菌(包括病毒)得到富集,从而达到分离各种颗粒的目的.
其次,分离后的细胞或颗粒用电脉冲或其他的方法进行细胞溶解.溶解后的混和液用蛋白酶等进行处理,除去蛋白质.由于细胞中的DNA/mRNA等的含量较少,为了提高基因芯片的灵敏度,我们必须对分离出来的DNA/mRNA进行扩增.目前的扩增方法主要是PCR扩增.
最后,为了获得基因的杂交信号必须对目的基因进行标记.标记方法有荧光标记法、生物素标记法、同位素标记法等.常用的有以下几种方法制备和标记探针:将纯化的样品RNA通过特定的引物逆转录合成单链cDNA探针,在合成的过程中掺入标记物;或者先将待测样品的RNA转录合成cDNA,再进一步通过加入标记物进行体外转录合成cRNA单链探针,又或者将合成的cDNA加标记物和特殊引物进行PCR扩增,制备成标记的双链探针.
生物样品往往是非常复杂的生物分子混合体,除少数特殊样品外,一般不能直接与芯片反应,必须将样品进行生物处理.
首先,必须把我们所需要的细胞、颗粒从混和细胞中分离出来.现在主要利用电场作用来分离细胞、细菌及颗粒(包括富集病毒以及破碎细胞使核酸和蛋白质释放出来).其中比较成熟的分离方法有介电电泳.其原理是:在不均匀的变换频率(在10~100kHz范围内)的交流电场中,不同细胞或颗粒由于介电性质不同而在交变电场中形成流过速度的差别,使某一类细胞或细菌(包括病毒)得到富集,从而达到分离各种颗粒的目的.
其次,分离后的细胞或颗粒用电脉冲或其他的方法进行细胞溶解.溶解后的混和液用蛋白酶等进行处理,除去蛋白质.由于细胞中的DNA/mRNA等的含量较少,为了提高基因芯片的灵敏度,我们必须对分离出来的DNA/mRNA进行扩增.目前的扩增方法主要是PCR扩增.
最后,为了获得基因的杂交信号必须对目的基因进行标记.标记方法有荧光标记法、生物素标记法、同位素标记法等.常用的有以下几种方法制备和标记探针:将纯化的样品RNA通过特定的引物逆转录合成单链cDNA探针,在合成的过程中掺入标记物;或者先将待测样品的RNA转录合成cDNA,再进一步通过加入标记物进行体外转录合成cRNA单链探针,又或者将合成的cDNA加标记物和特殊引物进行PCR扩增,制备成标记的双链探针.
基因探针与标记基因的关系?
地高辛标记核酸探针时为什么用地高辛配基标记于dUTP上形成Dig-11-dUIP,而不标记于dATP、dTTP、dCTP
为什么要标记DNA探针
DNA探针的作用在什么阶段.
生物,我想知道DNA探针的作用.
核酸的作用
免疫核酸核酸的作用原理是什么?
标记生物细胞中的核酸.而不标记蛋白质.应标记的同位元素是
请问有谁知道核酸引物和探针PAGE纯化的步骤?
1)在基因工程中,抗性基因(标记基因)的作用和DNA探针的作用有什么不同.抗性基因不是已经能检查出目的基因是否进入受体细
采用用标记的目的基因作探针与mRNA杂交的方法叫什么
为什么检测目的基因是否转录出mRNA用标记的目的基因做探针?