大师作文网反转录中 RNA 和 引物的量
来源：学生作业帮 编辑：大师作文网作业帮 分类：数学作业 时间：2024/11/07 10:47:49
反转录中 RNA 和 引物的量
在用promega的MMLV做反转时,加OLIGO DT18时,说明书说每微克RNA加0.5微克OLIGO DT,我用了2ugRNA需要加 1ug的 oligo dt 18,但是我的oligo是TAKARA公司的,它的规格是50微摩尔/升的.我该怎么换算?你们平时做的时候,RNA的量和引物的量是什么比例?
在用promega的MMLV做反转时,加OLIGO DT18时,说明书说每微克RNA加0.5微克OLIGO DT,我用了2ugRNA需要加 1ug的 oligo dt 18,但是我的oligo是TAKARA公司的,它的规格是50微摩尔/升的.我该怎么换算?你们平时做的时候,RNA的量和引物的量是什么比例?
takara的试剂盒里推荐的使用量是每20ul体系使用total RNA1ug,浓度为2.5uM的oligo dt 1ul.同时还可以加入随机引物或者下游特异性引物,可以提高反转录效果.
再问： 你好，takara的 RNase inhibitor 给的反转录的参考是： 20ul 体系 用 总RNA 1ug，但用的引物 oligo dt 18 是 50pmol，这和 你上面说的反转的试剂盒 20ul 体系 用 总RNA 1ug，但引物 oligo dt 却只用了 2.5 pmol， 这相差也太大了吧？
再答： 你这么一问给我也问住了。我也查了一下你说的那本说明书，上面并不详细，也许是没有写明oligo dt 18的用量，而只是写random 引物的用量。oligo dt 只能作用于带polyA尾的mRNA,而总RNA中mrna占的量应小于5%吧。所以用量少于其他的反转录引物也是合理的（random引物和特异性引物都是可以完全作用于总RNA的。）。不知道你是否同意我的解释。
再问： 你好，非常谢谢你的回答。你说oligo dt 只作用与mRNA,大概5%，那你看 ：你说的那个试剂盒的参考 是总RNA1ug，加2.5pmol。 takara 的 Ribonuclease Inhibitor 的说明书给的参考是 模板RNA 1ug 加 oligo dt18或random primer（6-9mer）50pmol。问题是不是在这个总RNA 和模板RNA上， 这个模板RNA难道是指 mRNA 的量么？你看 2.5pmol 除以5%=50pmol，正好是 说明书上的 模板RNA 1ug 需要加的oligo的量。你说这样对么？
再答： 你好，其实我不是这么理解的，我是认为那RNase inhibitor上的说明书上写的不完善，在oligo dt18的后面没有写用量，random primer（6-9mer）50pmol这是应该的，因为其他的试剂盒里推荐的random primer使用量也是20uM加1ul（即20pmol）这就和50pmol没有数量级的差别，合理的差距。而1ug total RNA中只有小于5%的mRNA，所以这种只作用于mRNA引物的使用量也要小到相应的数量级，这也是合理的，这也只是我自己的一点看法，希望对你有帮助。
再问： 你好，takara的 RNase inhibitor 给的反转录的参考是： 20ul 体系 用 总RNA 1ug，但用的引物 oligo dt 18 是 50pmol，这和 你上面说的反转的试剂盒 20ul 体系 用 总RNA 1ug，但引物 oligo dt 却只用了 2.5 pmol， 这相差也太大了吧？
再答： 你这么一问给我也问住了。我也查了一下你说的那本说明书，上面并不详细，也许是没有写明oligo dt 18的用量，而只是写random 引物的用量。oligo dt 只能作用于带polyA尾的mRNA,而总RNA中mrna占的量应小于5%吧。所以用量少于其他的反转录引物也是合理的（random引物和特异性引物都是可以完全作用于总RNA的。）。不知道你是否同意我的解释。
再问： 你好，非常谢谢你的回答。你说oligo dt 只作用与mRNA,大概5%，那你看 ：你说的那个试剂盒的参考 是总RNA1ug，加2.5pmol。 takara 的 Ribonuclease Inhibitor 的说明书给的参考是 模板RNA 1ug 加 oligo dt18或random primer（6-9mer）50pmol。问题是不是在这个总RNA 和模板RNA上， 这个模板RNA难道是指 mRNA 的量么？你看 2.5pmol 除以5%=50pmol，正好是 说明书上的 模板RNA 1ug 需要加的oligo的量。你说这样对么？
再答： 你好，其实我不是这么理解的，我是认为那RNase inhibitor上的说明书上写的不完善，在oligo dt18的后面没有写用量，random primer（6-9mer）50pmol这是应该的，因为其他的试剂盒里推荐的random primer使用量也是20uM加1ul（即20pmol）这就和50pmol没有数量级的差别，合理的差距。而1ug total RNA中只有小于5%的mRNA，所以这种只作用于mRNA引物的使用量也要小到相应的数量级，这也是合理的，这也只是我自己的一点看法，希望对你有帮助。
mRNA反转录引物的问题?
qRT-PCR检测植物miRNA的表达量,内参基因选择什么最好?可以给出特意反转录引物和qRT-PCR的引物吗?
RNA的提取和反转录的实验步骤?
RNA反转录后,分别用内参引物和目的基因引物扩增,目标基因有条带,内参没有扩出来,问题可能处在什么地方
RNA是如何反转录成cDNA的?过程和原理怎样?
我提取RNA,反转录得到cDNA,我要由此扩增功能基因,请问引物设计时,用查到的mRNA序列,还是用cDNA序列
反转录病毒的遗传物质是RNA还是DNA?
RNA病毒都是反转录病毒
mRNA反转录是特异性引物加上游还是下游的
mRNA反转录中使用olig（t）18做引物所得到的是单链cDNA吗?如果是的话如何才能得到双链的cDNA啊?
DNA复制中,RNA引物的作用?
提取得总RNA有蛋白质污染会影响反转录的CDNA的浓度吗