丝状真菌的总DNA提取?
来源:学生作业帮 编辑:大师作文网作业帮 分类:生物作业 时间:2024/11/10 15:55:39
丝状真菌的总DNA提取?
丝状真菌用液体培养基震荡培养后,用布式漏斗抽滤后,在研钵上研磨后,直接用的SDS法提取,因为之前没做过,但是做过酵母菌和植物的,所以就按照之前的操作做了.没有用液氮,在加入乙醇沉淀离心后发现有DNA,但是被无色透明粘液状物质所包裹,也不无法融于TE或者无菌水中保存.网上搜索了下步骤发现
没有加入150μL 5mol/L KAc,混匀,置冰上20-30 min这一个步骤,是这个原因吗?那个物质是多糖,这个步骤是除去多糖的吗?
我为了研磨充分还加入了石英砂,但是离心取上清应该没有影响?样品中还有琼脂块没有除去.是琼脂的原因吗?
丝状真菌用液体培养基震荡培养后,用布式漏斗抽滤后,在研钵上研磨后,直接用的SDS法提取,因为之前没做过,但是做过酵母菌和植物的,所以就按照之前的操作做了.没有用液氮,在加入乙醇沉淀离心后发现有DNA,但是被无色透明粘液状物质所包裹,也不无法融于TE或者无菌水中保存.网上搜索了下步骤发现
没有加入150μL 5mol/L KAc,混匀,置冰上20-30 min这一个步骤,是这个原因吗?那个物质是多糖,这个步骤是除去多糖的吗?
我为了研磨充分还加入了石英砂,但是离心取上清应该没有影响?样品中还有琼脂块没有除去.是琼脂的原因吗?
建议用CTAB法来提取.真菌多糖较多,就是粘性物质.CTAB有助于去除多糖.
再问: 我后来发现我说错了,我是用的CTAB法,而且我发现我摇的菌结球才导致菌体外的次生代谢物才提不出DNA的,但是还想问一下,我看到也有很多的文献用的是SDS法,而且还有在破壁后加入KAc沉淀多糖物质,那到底那个方法效果好一些呢?CTAB在破壁后,抽提DNA之前也要加KAc吗?
再答: CTAB就挺好用的,我原来提的时候没加KAC。
再问: 我后来发现我说错了,我是用的CTAB法,而且我发现我摇的菌结球才导致菌体外的次生代谢物才提不出DNA的,但是还想问一下,我看到也有很多的文献用的是SDS法,而且还有在破壁后加入KAc沉淀多糖物质,那到底那个方法效果好一些呢?CTAB在破壁后,抽提DNA之前也要加KAc吗?
再答: CTAB就挺好用的,我原来提的时候没加KAC。
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