蓝白斑筛选
来源:学生作业帮 编辑:大师作文网作业帮 分类:综合作业 时间:2024/09/30 06:25:04
蓝白斑筛选
蓝白斑筛选是重组子筛选的一种方法:
是根据载体的遗传特征筛选重组子,如α-互补、抗生素基因等.现在使用的许多载体都带有一个大肠杆菌的DNA的短区段,其中有β-半乳糖苷酶基因(lacZ)的调控序列和前146个氨基酸的编码信息.在这个编码区中插入了一个多克隆位点(MCS),它并不破坏读框,但可使少数几个氨基酸插入到β-半乳糖苷酶的氨基端而不影响功能,这种载体适用于可编码β-半乳糖苷酶C端部分序列的宿主细胞.因此,宿主和质粒编码的片段虽都没有酶活性,但它们同时存在时,可形成具有酶学活性的蛋白质.这样,lacZ基因在缺少近操纵基因区段的宿主细胞与带有完整近操纵基因区段的质粒之间实现了互补,称为α-互补.由α-互补而产生的LacZ+细菌在诱导剂IPTG的作用下,在生色底物X-Gal存在时产生蓝色菌落,因而易于识别.然而,当外源DNA插入到质粒的多克隆位点后,几乎不可避免地导致无α-互补能力的氨基端片段,使得带有重组质粒的细菌形成白色菌落.这种重组子的筛选,又称为蓝白斑筛选.如用蓝白斑筛选则经连接产物转化的钙化菌平板37℃温箱倒置培养12-16hr后,有重组质粒的细菌形成白色菌落.
是根据载体的遗传特征筛选重组子,如α-互补、抗生素基因等.现在使用的许多载体都带有一个大肠杆菌的DNA的短区段,其中有β-半乳糖苷酶基因(lacZ)的调控序列和前146个氨基酸的编码信息.在这个编码区中插入了一个多克隆位点(MCS),它并不破坏读框,但可使少数几个氨基酸插入到β-半乳糖苷酶的氨基端而不影响功能,这种载体适用于可编码β-半乳糖苷酶C端部分序列的宿主细胞.因此,宿主和质粒编码的片段虽都没有酶活性,但它们同时存在时,可形成具有酶学活性的蛋白质.这样,lacZ基因在缺少近操纵基因区段的宿主细胞与带有完整近操纵基因区段的质粒之间实现了互补,称为α-互补.由α-互补而产生的LacZ+细菌在诱导剂IPTG的作用下,在生色底物X-Gal存在时产生蓝色菌落,因而易于识别.然而,当外源DNA插入到质粒的多克隆位点后,几乎不可避免地导致无α-互补能力的氨基端片段,使得带有重组质粒的细菌形成白色菌落.这种重组子的筛选,又称为蓝白斑筛选.如用蓝白斑筛选则经连接产物转化的钙化菌平板37℃温箱倒置培养12-16hr后,有重组质粒的细菌形成白色菌落.
蓝白斑筛选培养基怎么配啊?新手
外源基因插入puc18载体中导入大肠杆菌受体细胞筛选白斑还是蓝斑
实时定量PCR.亮氨酸拉链蓝白斑筛选操纵子还有一题简答题.简述原核生物的复制起始过程.
请详述乳糖操纵子正负调控机制,并结合此机制解释基因重组技术中蓝白斑筛选的原理.
基因工程中的α互补和蓝白筛选的原理
质粒dna的转化实验结果培养基上出现大量蓝斑和白斑分别是什么?为什么有这么多蓝斑?
为什么蓝白筛选时,筛选出的白色菌落要将进一步鉴定?哪些方法能确认阳性克隆?
外源基因与pUC18载体连接后,导入大肠杆菌细胞中,在选择性培养基中应该是挑取白斑还是蓝班?
白斑鸠体长多少?
我是做药物筛选的,用Hela细胞筛选药物时,MTT染色后,吸取培养基,加完DMSO之后有部分孔不溶(蓝紫色固体
斑马是白马黑斑还是黑马白斑?
铝合金锭表面出现白斑是什么问题?