不用iptg诱导,蛋白会表达吗

来源：学生作业帮编辑：大师作文网作业帮分类：化学作业时间：2024/11/06 16:33:36

不用iptg诱导,蛋白会表达吗
我做原核表达,载体为pet30a,转到BL21中,没有加入IPTG的菌液和加入IPTG 的菌液跑SDS-PAGE,在预测蛋白大小处均有蛋白表达,不知道什么原因为了确定是否为我的目的蛋白,做了W-B,抗HIS标签作为一抗,用羊抗鼠IgG-HRP作为二抗,曝出上下两条带,

不加IPTG也会有少量表达,即leaking
再问：什么意思？？怎么会出现这种情况
再答：正常现象啊。从原理上讲，BL21（DE3）里面的T7 RNA聚合酶是在placUV5启动子下面，这个启动子受lacI的抑制，加入IPTG则解除抑制，即诱导表达。但是包括lacI在内的抑制蛋白都不是绝对抑制的，即存在泄漏表达，分子机制上说，lacI也有脱落的时候。另外一种情况，你用的培养基里有少量的乳糖。

诱导大肠杆菌表达时IPTG的量 IPTG的诱导问题我在做诱导是遇到这样一个问题,做了0小时,1,2,3,4,5小时的诱导,可是诱导的蛋白并没有随时间增加用不同的大肠杆菌菌株进行乳糖操纵基因的诱导表达时,对iptg的需求有何不同原核表达菌液的OD值过高再去诱导蛋白可以吗如何通过调节IPTG的浓度和温度来控制蛋白质表达速度,从而提高蛋白的可溶性生物中加样量如何计算?如诱导细菌表达时加IPTG至终浓度1mmol/L,不知这个到底是加多少ml或ul 表达细菌自身的蛋白会形成包涵体吗 iptg诱导完的大肠杆菌想做western blot 该如何处理菌体? 高压匀浆处理硫氧还蛋白融合表达菌体,融合蛋白会发生断裂吗? 我现在用大肠杆菌基因工程菌做发酵实验,每次浊度都很高,用IPTG诱导,但产生的酶活却很低~急使用T7启动子,BL21（DE3)菌株,加入的IPTG的终浓度要到多大才能起到诱导的作用外源干细胞会诱导分化成生殖细胞吗?