rna探针制备时为什么将模板线性化

来源：学生作业帮编辑：大师作文网作业帮分类：生物作业时间：2024/11/16 15:10:35

rna探针制备时为什么将模板线性化

在RNA的杂交检测实验中,应用标记的RNA 探针将获得高灵敏度的杂交检测结果,与DNA 探针相比,检测灵敏度提高10-100倍.因为对于不同的杂交体类型来说,RNA-RNA杂交体的结合强度高于RNA-DNA和DNA-DNA杂交体.对于通过Northern blots检测低浓度mRNA,以及原位杂交的核酸定位检测等应用,RNA探针是一种理想选择.RNA探针同样也适用于Southern blots,文库筛选,斑点杂交等应用.但是,在RNA探针制备过程和整个杂交实验过程中,必须注意RNAse的防污染操作.
制备RNA探针的常用方法是构建含探针标记模板的重组质粒,将克隆子的转录区下游进行限制性酶切线性化后,进行体外转录的探针合成反应.当然,采用的质粒上必须含有SP6,T3或T7 RNA聚合酶的启动子序列.体外转录法合成的探针量很大,通常情况下,1μg的DNA模板进行反应,将得到20μg的标记RNA探针.
另一种更加直接的体外转录标记法,是先通过PCR方法制备DNA探针模板.扩增引物需要特殊设计,包含SP6,T3或T7 RNA聚合酶的启动子序列.
对于原位杂交的应用,为了更好地进行杂交反应的质控,建议在制备反义链探针的同时,也制备正义链的探针,用作杂交实验的阴性对照.在原位杂交实验前,首先通过Northern blots实验验证探针的有效性和目标转录子在不同样本中的表达模式,有助于简化后续原位杂交实验的优化流程和结果解释.

RNA分子可作为DNA合成的模板.为什么? 基因工程Klenow片断能否制备DNA探针? Taqman探针是DNA还是RNA? 高中生物基因工程问题：在获取目的基因时,既然可以制作基因探针,为什么不将此作为目的基因人工合成目的基因是将目的基因转录的信使RNA为模板合成,可是信使RNA哪里取得? RNA这种生物大分子都是以DNA分子为模板转录而来的,为什么错 DNA为什么是蛋白质合成的模板?不应该是RNA吗? 以dna为模板形成信使rna的过程为什么不是主要发生在核糖体上? 某个细胞中,某种RNA转录的模板链是用第一链,另外一种RNA转录时的模板链可能是另一条链? 为什么要标记DNA探针 dna探针为什么属于基因工程? DNA或RNA分子探针要用什么标记