大师作文网SOD的活性测定方法有些什么?有什么不同?现在常用的是什么方法?
来源：学生作业帮 编辑：大师作文网作业帮 分类：生物作业 时间：2024/11/11 11:12:42
SOD的活性测定方法有些什么?有什么不同?现在常用的是什么方法?
十分紧急
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SOD活性的测定方法
[ 2005-10-31 12:51:00 | By:abingxu ]
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推荐pH7.8最适,按邵从本等（1993）方法.
1.试剂：
反应液：含13×10-3M 甲硫氨酸（MW=149.21292）,75×10-6MNBT（MW=817.7）,2×10-6M核黄素（MW=376.36）,100×10-9MEDTA,50×10-3M磷酸缓冲液,pH7.8.
4.096225g Na2HPO4.12H2O,0.16576075g NaH2PO4.2H2O 用蒸馏水溶解,加入0.484942g 甲硫氨酸、0.01533g NBT、0.00075272g 核黄素（扩大10倍,溶于10ml蒸馏水,取0.25ml,此2种药剂现用现加）及0.000037224g EDTANa2（配时扩大100倍,用蒸馏水定容100ml后,取0.75ml）,定容至250ml,4℃避光保存.
2．操作：
取30支粗细、厚薄一致的洁净试管,分别加入3.98反应液,29支加20ul( )酶液,另一支不加酶液加同样体积的提取缓冲液,以1支加酶的不作光照处理的为空白对照,余4000Lux照光20-25分钟后测OD560,每提取液重复3次,取平均值.
3.计算：在上述条件下,抑制50％NBT光化还原的酶量定为一个酶单位,按Constantine N.et al 1977(Pl.Physiol.59:309-314)方法计算酶比活力.
SOD units/mg protein = {[ OD560 (不加酶)/ OD560（加酶）-1]×稀释倍数×4（反应液体积）}/
[0.02（所加酶液ml数）×每ml酶粗提液含蛋白mg]
[ 2005-10-31 12:51:00 | By:abingxu ]
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推荐pH7.8最适,按邵从本等（1993）方法.
1.试剂：
反应液：含13×10-3M 甲硫氨酸（MW=149.21292）,75×10-6MNBT（MW=817.7）,2×10-6M核黄素（MW=376.36）,100×10-9MEDTA,50×10-3M磷酸缓冲液,pH7.8.
4.096225g Na2HPO4.12H2O,0.16576075g NaH2PO4.2H2O 用蒸馏水溶解,加入0.484942g 甲硫氨酸、0.01533g NBT、0.00075272g 核黄素（扩大10倍,溶于10ml蒸馏水,取0.25ml,此2种药剂现用现加）及0.000037224g EDTANa2（配时扩大100倍,用蒸馏水定容100ml后,取0.75ml）,定容至250ml,4℃避光保存.
2．操作：
取30支粗细、厚薄一致的洁净试管,分别加入3.98反应液,29支加20ul( )酶液,另一支不加酶液加同样体积的提取缓冲液,以1支加酶的不作光照处理的为空白对照,余4000Lux照光20-25分钟后测OD560,每提取液重复3次,取平均值.
3.计算：在上述条件下,抑制50％NBT光化还原的酶量定为一个酶单位,按Constantine N.et al 1977(Pl.Physiol.59:309-314)方法计算酶比活力.
SOD units/mg protein = {[ OD560 (不加酶)/ OD560（加酶）-1]×稀释倍数×4（反应液体积）}/
[0.02（所加酶液ml数）×每ml酶粗提液含蛋白mg]