我在设计引物的时候出现了疑问
来源:学生作业帮 编辑:大师作文网作业帮 分类:综合作业 时间:2024/10/08 06:20:57
我在设计引物的时候出现了疑问
新手菜鸟求助,师姐曾留下一个设计好的质粒,酶切位点少.然后我打算将她的目的基因换成我自己的.但我的目的基因上酶切位点很多,启动子和终止子之间仅有的两个酶切位点目的基因上均有.我想可不可以将启动子抠下来,末端引物设计再多加一个酶切位点,即末端引物共两个酶切位点,然后再按上.不知各位高人是否其他的高见?一段设计两个酶切位点可行度是否较低?
新手菜鸟求助,师姐曾留下一个设计好的质粒,酶切位点少.然后我打算将她的目的基因换成我自己的.但我的目的基因上酶切位点很多,启动子和终止子之间仅有的两个酶切位点目的基因上均有.我想可不可以将启动子抠下来,末端引物设计再多加一个酶切位点,即末端引物共两个酶切位点,然后再按上.不知各位高人是否其他的高见?一段设计两个酶切位点可行度是否较低?
具体有些什么酶切位点,能说来听听嘛?空对空很难讨论出什么结果.
再问: 您说启动子和终止子之间的酶切位点吗?HindIII-启动子-BamHI-师姐的目的基因-SacI-终止子 ,我的目的基因上有BamHI 。所以我想将启动子下游加上一个酶切位点,这样下游就有两个酶切位点:HindIII-启动子-SacI-多插入的酶切位点-终止子,然后用SacI和插入的酶双酶切加入我的基因就行了。您看这样可行性大吗?
再答: 你的意思是用启动子为模板做PCR,利用PCR把一个酶切位点引入启动子下游,对吧?这么做当然可以,不过完成后你可能要对启动子测序,因为PCR可能会造成启动子有突变。所以这不是最好的策略。 你的目的基因也要经过PCR,然后再连接到这个载体中吗?还是直接从其它载体切下来接进去?你的目的基因上有BglII吗?
再问: 我本想将启动子弄到一个质粒上,再切下来 但是序列总是不如意 所以我想只有这种方法了 但是一段引物加两个位点总觉得不太可行 作为一个新手菜鸟来说。目的基因也要经过PCR的 Bgl II酶切位点 目的基因上是有的。。。。
再答: 目的基因上游有什么能用的酶切位点?你做过平端连接吗?
再问: 您说启动子和终止子之间的酶切位点吗?HindIII-启动子-BamHI-师姐的目的基因-SacI-终止子 ,我的目的基因上有BamHI 。所以我想将启动子下游加上一个酶切位点,这样下游就有两个酶切位点:HindIII-启动子-SacI-多插入的酶切位点-终止子,然后用SacI和插入的酶双酶切加入我的基因就行了。您看这样可行性大吗?
再答: 你的意思是用启动子为模板做PCR,利用PCR把一个酶切位点引入启动子下游,对吧?这么做当然可以,不过完成后你可能要对启动子测序,因为PCR可能会造成启动子有突变。所以这不是最好的策略。 你的目的基因也要经过PCR,然后再连接到这个载体中吗?还是直接从其它载体切下来接进去?你的目的基因上有BglII吗?
再问: 我本想将启动子弄到一个质粒上,再切下来 但是序列总是不如意 所以我想只有这种方法了 但是一段引物加两个位点总觉得不太可行 作为一个新手菜鸟来说。目的基因也要经过PCR的 Bgl II酶切位点 目的基因上是有的。。。。
再答: 目的基因上游有什么能用的酶切位点?你做过平端连接吗?
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