大师作文网菌落PCR引物Tm值相差大可以吗??
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/11/12 15:49:01
引物设计软件都可以给出Tm,引物长度,碱基组成,引物使用缓冲的离子强度有关.长度为25mer以下的引物,Tm计算公式为：Tm=4℃(G+C)+2℃(A+T)对于更长的寡聚核苷酸,Tm计算公式为：Tm=
博凌科为-为你先看一下Tm的定义：Tm=Temperatureatwhich50%ofagivenoligonucleotideishybridizedtoitscomplementarystrand
Tm(解链温度)是指50%双链被解开成单链时的温度.寡核苷酸浓度和盐浓度会影响Tm值的大小.Tm 值 有 多 种
菌落PCR建议,对菌落进行预变性处理,将挑取的单克隆溶于10ul无菌水（1半保存）,分5ul出来进行95度10min变性然后直接放冰上进行预变性处理,相当于提高模板量,提高产量. 有杂带,建议提高T
那就扩增不出来了呗~再问：不大可能扩不出来，最多是扩的乱七八糟，因为一种引物“失效”，那它起码也是“不对称PCR”啊。请问允许的最大差异是多大？再答：你用primerpremier设计引物不就得了
这个百度看一下吧
负责引物合成的公司会给你引物的详细信息,其中有理论Tm值,应该是和这个公式Tm=2*（A+T）+4*(G+C)计算的一样,你在进行调整优化即可.
那是一对引物,通常所说的正向,反向.他们的碱基不一样,当然Tm值也就不一样了.所以设计引物时尽量设计一术的Tm值,有利于选择最佳的退火温度.
退火温度
不同的引物当然退火温度也不相同,一般在设计引物的时候,程序就会显示出Tm值是多少.在做PCR的时候,将退火温度设定的稍微低于Tm值一点,降低引物的特异性,可能会好点.当然,做PCR有一定的运气成分,同
试试把退火时间延长一些,看能不能把两条链连上.一般就是照着引物的Tm值做就可以的.再问：退火时间是30S，应该足够了，对于退火温度能给个建议吗？我现在不加两端引物，先做Pool，看看能不能连，谢谢你的
把其中的一个引物的长度增加,让两个引物的Tm值接近一些好了.再问：那么二聚体和发卡结构的影响大么？再答：发卡结构我一般不考虑。二聚体的话，如果两个引物之间互补的序列不是很多的话，影响也不大。
当然可以,前提是你引物设计的好!没有非特异性扩增,怎么会没有意义呢?放心做吧!
ThebesttemperatureforTaqpolymeraseis72C.IfyourprimerTmishigherthan72C,thenthepolymerasewouldnotworkw
Tm指的是把DNA的双螺旋结构降解一半时的温度.我们PCR时候,当然不能用Tm值来作为退火的温度.一般来说,退火温度比Tm值要低上5度左右.但是这个也不是绝对的.建议你如果说模板比较充足的话,做一个梯
Tm值本来就是人为定的一个预测值,三个Tm值代表的是不同的计算方法,常用的是第三种2*AT+4GC.看退火温度时,酶切位点和保护碱基一般是不考虑在内的,因为pcr扩增时这段序列一般是不跟模板结合的,所
从原理角度分析,在Tm值的温度下,引物只能1半与模板DNA结合,低几度就全结合上去了.PCR扩增时需要引物完全结合到模板上才行.
第一次PCR产物不要做任何处理,直接吸取1微升做第二轮PCR的模板.第二轮PCR过后再跑胶回收你的目的条带.外引物不在你的目的基因上,而在你的目的基因两侧.所以你设计外引物时是从一个很宽泛的范围内寻找
一般来说,引物都是成对设计的,包括上游引物和下游引物；除非你设计出来的上游引物与下游引物相同,才可用单引物扩增.否则,若用单引物则只能扩出一条链再问：用单引物扩增出的产物跑电泳，在紫外灯照射下的条带是