如何计算引物的Tm值?

请教如何计算引物的Tm值? 引物的TM值如何计算 如何计算引物的Tm值? 引物的Tm值是什么 如何理解Tm= 4(G+C)+2(A+T).比如说一段引物的G+C含量为40%,那么这段引物的Tm值是多少? 引物的退火温度如何计算,用tm值减去5度,靠谱不?用1m na+的还是50mmna+? 引物的长度包括酶切位点在内么?计算Tm值以及计算GC含量时用算酶切位点的么? 我的引物该如何选择?我要设计兼并引物,但是两个最佳位置处的引物Tm值相差较大,而且有二聚体和发卡结构,其余的位置兼并位点 PCR中Tm值如何计算? 为什么做PCR设定引物退火温度时设定的退火温度要比合成引物得到的引物Tm值低几度? PCR中 两个引物的Tm值相差太大有什么害处? 如果从primer5中得到引物的tm 值怎么确定pcr温度