PCR产物测序出现双峰跟SNP有关吗

首先你要有你目的产物和测序的DNA序列在网页最下端第二行有AligntwosequencesusingBLAST(bl2seq),点击进入看到有Sequence1和Sequence2,这里面分别输入你

SNP就是普通PCR,最简单的,因为SNP位点是PCR后酶切看产物条带的.再问：谢谢那普通的PCR是不是半定量的？我填资料他那个是普通半定量PCR的引物我不是很确定再答：和定量，半定量没有关系的。。引

使用标准浓度内参.

1.先看下PCR电泳图里杂带多不多,若有的话很可能非特异性扩增了2.若条带干净,仍然有可能存在非特异性扩增,引物特异性不高导致竞争结合可将DNA直接酶切看是否能切出你的目标片段3.序列比对结果不能只看

当然可以的.

你的pcr产物不就是你的目的EST序列咩?你设计的引物就是为了把目的EST序列扩增出来啊

你的序列AT含量很高,测序结果不好,所以我怀疑是你的片段里有polyA或者是polyT,一般超过7个以上的都会引起后续的测序乱峰,你的乱峰前边如果是一连串的A或者T的话,那就是这个原因,想要测好得靠运

MspI酶,或者说任何DNA限制酶都有一个最适合的底物浓度去反应,我估计你的PCR产物浓度很大,你不妨考虑一下这一点.至于你说的酶切产物变大的这个问题,个人认为你用1%的胶去跑290bp的条带是测不准

能说一下你这样酶切的目的么?40bp和36bp的条带,只相差4个bp,基本上在琼脂糖胶上就不用考虑分清楚了.最好使用聚丙烯酰胺凝胶,很多用变性聚丙烯酰胺凝胶,可以分离到碱基数相差很少的条带,而某些变性

可以继续.只需补充加入内切酶便可.因为你的buffer没有消耗,而BSA本身只是为了保护酶活性的杂蛋白,没有特别功能,量的多少本来关系也不很大.同行,好运!

原理：是来至于双脱氧链终止法——现在应用最多的核酸测序技术,由Sanger等1977年提出：模板经过测序PCR反应后形成3'末端带有荧光标记（早期用同位素标记）的相差一个碱基的不同长度的产物,再根据每

你让公司测通不然最多只能测1000左右的序列而且只有不到800的测序是靠谱的后面的都不靠谱再问：测出1000bp，前面20bp左右序列不太一样，后面都是一样的，还有测通是什么意思，全部的序列都能测出吗

最一般的情况是,两个组分没有分开,优化色谱条件可以改善,直至彻底分开.

“从头拖到尾,另外一对引物就能做出来”说明不是引物之间形成二聚体,而是第一对引物的设计有问题（特异性很差）.如果一定要扩增那个区,建议引物的位置向两边放一放.如果你没有好的设计软件,建议到Primer

PCR产物测序的最大风险是有在凝胶上看起来的一个条带,实际上有多个分子.也就是说长度相似的分子有可能在电泳的时候只有一条带.如果只是进行PCR产物回收,没有进行凝胶分离的过程的话,东西可能更多了.问题

非特异性条带的出现,其原因：一是引物与靶序列不完全互补、或引物聚合形成二聚体.二是Mg2+离子浓度过高、退火温度过低,及PCR循环次数过多有关.其次是酶的质和量,往往一些来源的酶易出现非特异条带而另一

非特异性扩增太多,建议稀释模板.提高退火温度,再试试.还有如果一次PCR产物也是如此,建议切胶回收与目的条带相近处的弥散带作为二次的模板.

可以,不过要用TaqMan法

楼上说的是一方面.PCR产物测序也是可以的,可以送粗样,也就是不纯化的,也可以送纯化好的.但很多公司测的不是很好,所以一般建议转到克隆载体中保存了送菌液或质粒测序.PCR产物纯化是去除多余的dNTP和

你需要保存多久?我最多放过两三天,没问题再问：我周三晚上扩增出来的，结果给忘记放冰箱了，刚刚才放进去，后边要做DGGE，还可以用么？再答：不好意思DGGE实验我没有操作过。但是从理论上来说，2天不会降