rna琼脂糖凝胶电泳需要扩增吗
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/11/18 22:09:40
你给的信息的确很少了.楼上2位都分析的很好,不过,我补充说一下露姬雅关于质粒三条带的解释.现在对于3条带的解释是这样的:最前面跑最快的是超螺旋,质粒是超螺旋的,你电泳的时候最亮很正常;中间的是开环质粒
琼脂糖凝胶电泳时戴一次性手套能够有效阻止EB的渗入.EB是强诱变剂并有中等毒性,配制和使用时都应戴手套,并且不要把EB洒到桌面或地面上.凡是沾污了EB的容器或物品必须经专门处理后才能清洗或丢弃.我做的
检验一下产生的扩增后的片段的长度和浓度~要是片段长度为目的片段长度或者相差不多的话,就说明扩增成功了~有的时候扩增完电泳会发现片段长度与目的基因的差了好多,那就是有问题啦~而且有的时候还会出现多条带等
RNA跟DNA不一样,主要现象就是降解1.提取过程中RNA出现降解2.洗脱的时候洗掉了3.18S有部分降解4.弥散带说明降解严重,杂质过多5.28S部分降解RNA完美提出来的话应该是三条带:28,18
RNA分子有很多二级结构,需经变性剂处理,而DNA一般不需要变性处理RNA电泳的电泳槽及缓冲液均需要确保无RNAase,有RNAase抑制剂处理过;而DNA相应的则需要DNAase抑制剂处理所用的缓冲
一般来说1%的浓度就够了,如果你的样品分子量比较大,可以用2%的,浓度越大,胶越硬.你做的胶不能拿,用的是TBE缓冲液吗?配完后,需要加热至沸腾,然后再冷却.还有,你用的是琼脂粉还是琼脂糖?做胶用琼脂
根据你扩增的产物情况选择合适分辨率的凝胶浓度,比如:如果你的条带离引物二聚体很远,且比较单一,那可用1%~1.5%的胶即可,可稍微制厚一点,方便点样;如果你的条带只有一两百即离引物二聚体很紧或者非目标
实验有没有跑标准分子量DNAMarker?如果Marker电泳后条带正常,那么就是PCR无扩增条带;如果Marker也看不见,那就是配胶有问题,或者配胶用的试剂(比如染料)有问题
核酸分子是两性解离分子,在高于其等电点的电泳缓冲液中,其碱基不解离,而磷酸基团全部解离,核酸分子因而带负电荷,电泳时向正极迁移.琼脂糖主要从海洋植物琼脂中提取而来并经糖基化修饰,为一种聚合链线性分子,
琼脂糖凝胶电泳marker是用来做参考的,类似于标尺的作用.marker会跑出很多条带,对应带的片段长度是一定的(不同的marker,不同,可以查询);通过找到与样品平齐的带,可以间接地判定样品的片段
不用那么高你又不跑PAGE琼脂糖一般都不用超过220V一般如果是只调电压的那种150V左右足够用了如果是电流和电压同时调的50ma,100~120V就可以
蛋白污染可以考虑用酚氯仿多抽提几次,记得吸上清的时候小心点,宁可浪费也别吸到界面.一般后续还需要用氯仿/异戊醇抽提来去除酚.这样基本蛋白污染就可以去干净.实在不行,抽提一次后,就用蛋白酶K消化30mi
如果是核酸marker比较简单吧,就是看marker条带的大小和你的目标条带的关系,尽量选择目标条带接近分子量的marker,或是在目标分子量附近条带较多的marker.另外就是,如果目标分子量很小,
提取的时候饱和酚,氯仿需要定量,这些可以去蛋白.去除RNA污染,RNA酶活性,定量.凝胶电泳,试剂最好是即用型的,因为有些东西放久了会长菌.然后是染料的热稳定性和灵敏度.
这个看上去像是你在做梯度PCR,所以有很多条带是弥散状的,你可以把比较清晰的条带回收回来,作为模板,利用你之前做梯度得到的优化后的PCR条件再进行一次PCR,看效果如何.补充:这样的话,可能是你不同样
如果扩增的是质粒DNA果断是有区别的,因为质粒DNA会有三种构象,超螺旋(正常态),还有一种是线性的,一种是开环的,变性剂处理之后估计只有线性的了,跑出来地带肯定不一样如果是普通的线性DNA,我觉得加
首先要知道电压高低对跑胶的影响,才能决定快慢嘛电压高低是相对的,胶才是本质,电压过高会因为发热导致胶融化,跑太长时间marker会跑出去,甚至污染电解液如果电压相同,你配0.8%的胶肯定比配1.2%要
不是啊,PCR扩增后再用琼脂糖凝胶电泳检测.
可能性太多了.1.你跑胶一般都要放MARKER或者叫DNALADDER吧,这个MARKER除外对DNA标记大小以外,还可以用来监控ELECTROPHORESIS的质量,如果MARKER显示而DNA没显
greenview没用过,只用过EB.我不在甲醛胶里加EB,好像那样背景比较高.我都是在变性RNA时在RNA loading buffer里加EB,胶上没什么背景.你先试一下看看吧