交叉配血试验的详细操作过程和试剂名称

交叉配血试验的详细操作过程和试剂名称

1.原理
凝聚胺（polymatching）法首先利用低离子介质降低溶液的离子强度,减少红细胞周围的阳离子云,促进血清（浆）中的抗体与红细胞相应抗原结合,再加入带亚电荷的高价阳离子多聚物-凝聚胺溶液,中和红细胞表面的负电荷,缩短细胞间距,形成可逆的非特异性聚集,并使IgG型抗体直接凝集红细胞.加入中和液后,仅由凝聚胺引起的非特异性聚集,会因电荷中和而分散,而由抗体介导的特异性凝集则不会分散.
2.标本采集：
2.1 标本种类：抽取静脉血3-4ml待凝固后分离血清,将细胞配成5％盐水悬液将供血者血样以同样方法分离血清(浆)和红细胞悬液.
2.2 标本要求：抗凝和干燥管均可,如用抗凝血主张用EDTAK2（mg/dz）抗凝标本应无溶血,切标签齐全.
3.标本储存：急诊标本30分钟内完成操作,标本应至4℃冰箱保存7天.
4.标本运输：室温运输.
5.标本拒收标准：细菌污染.溶血标本,标签不齐全不能作测定.
6.试剂：
6.1 试剂名称：凝聚胺试剂(polymatching)
6.2 试剂生产厂家：(台资)珠海贝索生物技术有限公司.
6.3 试剂组成：
试剂1.低离子介质(LowLonic Medium,LIM).试剂打开使用后,可置室温贮存,未开封者2-10度贮存,有效期为2年.
试剂2.凝聚胺溶液(PolybreneSolution).贮存及有效期同上.
试剂3.重悬液(ResuspendingSolution).贮存及有效期同上.
试剂4.8.5％生理盐水.
7.仪器：
7.1 血型血清索离心机：XTL-4.7 上海离心机械研究所
7.2 离心机：上海手术器械厂
7.3 电热恒温水箱：北京长源实验设备厂
7.4 显微镜：OLYMPUS(日本)
8.操作步骤及结果判断：
8.1 供受者红细胞用生理盐水配成3-5％的细胞悬液.加样量均为：血清2滴,红细胞悬液1滴.主管：受血者血清+供者红细胞悬液;次管：受者红细胞悬液+供者血清;(阴阳对照管另设).
8.2 各管分别加低离子介质0.6ml混匀置室温1分钟.加凝聚胺溶液2滴,混匀,置室温15秒.
8.3 1000g(3000rpm),离心18秒,弃上清液,管底保留约2滴液体.轻摇
试管,观察是否形成凝块.如未形成凝块,则重做前面试验.
8.4 加入2滴重悬液,轻轻混合,肉眼或显微镜下观察结果.
8.5 凝块在1分钟内分散,试验结果为阴性,供受者血液配合;反之,如依照为不同强度的凝块,试验结果判为阳性,供受者血液不配合.实验结果必须在3分钟内判读.
9.操作性能：快速简便,特异性强,灵敏度较高,重复性好.
10.超出范围结果处理：
10.1 细胞自凝：在冬天气温较低时,某些病人血清中含有冷凝集素而导致交叉配血假阳性;遇此现象可用37℃-40℃生理盐水洗涤红细胞并置37℃水溶中轻轻摇动,观察结果.
10.2 若病人血清(血浆)含有肝素,如洗肾患者能影响配血,须多加4-6滴polybrene溶液以中和肝素.
10.3 红细胞悬液为5％为宜,过浓或过淡可使抗原抗体比例不适当,反应不明显易误判.
10.4 各种原因引起的红细胞溶解,误判为不凝集,部分溶血时,可溶性血型物质中和了相应的抗体.
11.方法局限性：
11.1 试管,滴管吸头和玻片必须清洁干燥,防止溶血.
11.2 操作方法应按规定,先加血清,然后再加红细胞悬液,以便容易核实是否漏加血清.
11.3 离心时间不宜过长或过短,速度不宜过快或过慢,以防假阳性或假阴性结果.
11.4 观察时应注意红细胞呈特异性凝集,继发性凝固及线状排列的区别.