求助：分子生物学考博试题：在大肠杆菌中表达动物激素的基因可能遇到的问题及解决方法

来源：学生作业帮编辑：大师作文网作业帮分类：生物作业时间：2024/11/19 03:08:48

答：要使动物中编码激素的基因在大肠杆菌中表达,通常遇到的问题有：
(1)细菌的RNA聚合酶不能识别真核生物的启动子.
(2)大多数真核基因有内含子,这些内含子在转录后从前体mRNA中被切除而形成成熟mRNA.细菌细胞没有这样的机制来去除内含子.
(3)有些真核生物的蛋白质是通过前体分子加工而来的,例如胰岛素就是通过加工去除前体分子内部的33个氨基酸残基而来,剩下的两段肽链分别形成胰岛素的a、b链.
(4)产生的真核生物的蛋白质产物可以被细菌的蛋白酶所识别和降解.
针对上述可能出现的问题,建议在克隆的过程中采取以下措施：
①应将激素的编码序列置于含有核糖体结合位点和起始密码子ATG的细菌强启动子的附近(含有这种序列的载体称表达载体).
②可以以激素的mRNA为模板用反转录酶合成激素的基因.这种DNA不含内含子可插入到载体中进行克隆.此外,如果蛋白质序列短则可通过化学合成得到该基因.合成的基因应含起始密码ATG、通过该激素蛋白的氨基酸序列推测而来的编码序列,以及1~2个终止密码：
ATG——————编码序列————————TGA TAG
现在,这个合成基因可被插入载体中.
③有时加工过程可以在离体条件下进行.如果加工有困难,可以用合成基因,从而免除加工过程.
④选用合适的突变型宿主从而防止蛋白酶水解.如果用酵母作为宿主上述许多问题都可以较容易地解决,尤其是现在有既能在大肠杆菌中又能在酵母中复制的穿梭质粒载体.
说明：1)ATG,TAG和TGA是对应mRNA中的转录起始信号AUG和终止信号UAG,UGA的DNA序列.
2)克隆生长素释放抑制因子基因时采用化学合成基因的方法.生长索释放抑制因子是一种由下丘脑分泌的激素,长14个氨基酸残基,因此人工合成的基因,包括在宿主菌中表达所需的转录的起始和终止信号,仅51bp长.

求助：分子生物学考博试题：在大肠杆菌中表达动物激素的基因可能遇到的问题及解决方法 1、如何以大肠杆菌的质粒DNA为载体克隆一个编码动物的技术的基并使之在大肠杆菌中表达2、简要说明实验中可能遇到的问题及解用大肠杆菌表达动物基因一般会遇到什么问题? 如何以大肠杆菌质粒DNA为载体克隆一个编码动物激素的基因,并使之在大肠杆菌中进行九年级化学有关除杂问题的解决方法及试题首次在大肠杆菌中克隆并表达了人生长激素释放抑制素基因的到底是哪个国家的科学家如何以大肠杆菌表达系统克隆并表达一个编码动物激素的基因?实验设计题,写出所以尽可能的详细方案,并说明真核基因在大肠杆菌表达系统中表达的条件如何以大肠杆菌质粒DNA为载体克隆一个编码动物激素的基因. 如何以大肠杆菌质粒DNA为载体克隆一个编码蛋白的基因,并使之在大肠杆菌中表达人的基因之所以能在大肠杆菌中表达原因是设计一个实验,将猪脂肪沉积的某个基因在大肠杆菌中表达.