大师作文网Affinity pull down assay (DAPA)的实验原理?
来源：学生作业帮 编辑：大师作文网作业帮 分类：政治作业 时间：2024/11/12 18:21:11
Affinity pull down assay (DAPA)的实验原理?
我正在看的文献里方法上是这样说的，先设计DNA probe，然后获得一个400bp的probe，再hybridized to 链霉亲和素--coated magnetic beads。
再把这个跟细胞核提取物孵育，然后The probes were then immobilized on a magnetic stand,and unbound proteins were removed。
谁能简单介绍下原理
我正在看的文献里方法上是这样说的，先设计DNA probe，然后获得一个400bp的probe，再hybridized to 链霉亲和素--coated magnetic beads。
再把这个跟细胞核提取物孵育，然后The probes were then immobilized on a magnetic stand,and unbound proteins were removed。
谁能简单介绍下原理
你基本都说出来了.
DNA probe 和链霉亲和素杂交在一起,而链霉亲和素能够和magnetic beads亲和结合,所以经过孵育之后,再将细胞核提取物流过beads,DNA probe是400bp的,所以和目的DNA结合力相当高,就将目的DNA留在beads里面,其他不能结合的就都被去除.最后,在用专门的洗脱液（对应于链霉亲和素）进行洗脱,得到目的DNA.
你可以看看 GST-tag ,his- tag,等等pull down assay 的实验原理,虽然这些是针对蛋白的,但是原理一样,很简单的,记得做好control就行了.
再问： 可是这篇文章里说的，最后是用westernblot检测的蛋白啊，不是得到目的DNA吧？
再答： 你没有弄懂，洗脱后留下的ＤＮＡ还是和链霉亲和素结合在一起，洗脱液只是把它从ｂｅａｄｓ中洗脱下来。而ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ是用来检测链霉亲和素蛋白，而它不是又和ＤＮＡ在一起么，所以间接检测的是ＤＮＡ。否则你怎么检测目的ＤＮＡ，再设计一次ｐｒｏｂｅ？显然不是，设计这种加特殊蛋白ｔａｇ的ＤＮＡ ｐｒｏｂｅ意义就在于方便检测。
DNA probe 和链霉亲和素杂交在一起,而链霉亲和素能够和magnetic beads亲和结合,所以经过孵育之后,再将细胞核提取物流过beads,DNA probe是400bp的,所以和目的DNA结合力相当高,就将目的DNA留在beads里面,其他不能结合的就都被去除.最后,在用专门的洗脱液（对应于链霉亲和素）进行洗脱,得到目的DNA.
你可以看看 GST-tag ,his- tag,等等pull down assay 的实验原理,虽然这些是针对蛋白的,但是原理一样,很简单的,记得做好control就行了.
再问： 可是这篇文章里说的，最后是用westernblot检测的蛋白啊，不是得到目的DNA吧？
再答： 你没有弄懂，洗脱后留下的ＤＮＡ还是和链霉亲和素结合在一起，洗脱液只是把它从ｂｅａｄｓ中洗脱下来。而ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ是用来检测链霉亲和素蛋白，而它不是又和ＤＮＡ在一起么，所以间接检测的是ＤＮＡ。否则你怎么检测目的ＤＮＡ，再设计一次ｐｒｏｂｅ？显然不是，设计这种加特殊蛋白ｔａｇ的ＤＮＡ ｐｒｏｂｅ意义就在于方便检测。
Affinity pull down assay (DAPA)的实验原理?
pull-down assay和免疫共沉淀的区别
pull-down的原理与操作步骤
pull down 与bring down的区别
pull down,pull
pull down
以下几个短语的区别pull down pull out pull into pull throughget on get
和pull down 意思相同的短语
GST pull down实验结果怎么看啊
英语中bring down和pull down的区别是什么?
BCA protein assay试剂盒是检测蛋白浓度的原理是什么
the old school____(pull)down