请问Pfu DNA Polymerase用于PCR能保证扩增多大的片段无错配?
来源:学生作业帮 编辑:大师作文网作业帮 分类:生物作业 时间:2024/09/22 01:45:47
请问Pfu DNA Polymerase用于PCR能保证扩增多大的片段无错配?
pfu dna polymerase是目前已知dna合成准确性最高的酶.在正常的pcr扩增程序下,其扩增产物的错误率为4000bp中发生一个.错误率仅为taq dna polymerase的1∕7--1∕10.pfu dna polymerase的耐高温性亦优于taq dna polymerase,变性温度可高至98℃(此时必须加矿物油以免反应组分蒸发)以扩增gc含量较高的模板.
通常pfu dna polymerase的扩增程序为:
变性温度 94℃-98℃, 5-10分钟
变性温度 94℃-98℃, 15秒-2分钟
复性温度 40℃-68℃, 30秒-2分钟
延伸温度 68℃-75℃, 扩增速率1分钟1kb,根据目的片断长度另加15秒至1 分30秒, pfu dna polymerase的最适温度在74℃左右.
扩增25到35个循环.
注意事项:
1. pfu dna polymerase由于具有校正功能,dna合成速率慢于 taq dna polymerase,同时所需的dntp量一般要高于 taq dna polymerase,一些小公司的dntp浓度往往低于其标定值有时甚至要低一倍左右,导致pfu dna polymerase的扩增失败.
2. pfu dna polymerase产生的片断为平末端,不能直接用于t-载体克隆,可用taq dna polymerase加a末端后再用于t-载体克隆或直接在引物的5’端设计合适的酶切位点,酶切后再克隆到相应酶切载体.
3. 保存在-20℃. 本产品pfu dna polymerase 的storage buffer组分为:50mm tris-hcl(ph8.2 at 25℃),0.1mm edta, 1mm dtt,50%甘油,0.05% chaps;
10x reaction buffer with mgso4的组分为: 200mm tris-hcl(ph8.8 at 25℃),100mm kcl,100mm (nh4)2so4, 20mm mgso4, 1.0% triton x-100, 1mg/ml bsa.
通常pfu dna polymerase的扩增程序为:
变性温度 94℃-98℃, 5-10分钟
变性温度 94℃-98℃, 15秒-2分钟
复性温度 40℃-68℃, 30秒-2分钟
延伸温度 68℃-75℃, 扩增速率1分钟1kb,根据目的片断长度另加15秒至1 分30秒, pfu dna polymerase的最适温度在74℃左右.
扩增25到35个循环.
注意事项:
1. pfu dna polymerase由于具有校正功能,dna合成速率慢于 taq dna polymerase,同时所需的dntp量一般要高于 taq dna polymerase,一些小公司的dntp浓度往往低于其标定值有时甚至要低一倍左右,导致pfu dna polymerase的扩增失败.
2. pfu dna polymerase产生的片断为平末端,不能直接用于t-载体克隆,可用taq dna polymerase加a末端后再用于t-载体克隆或直接在引物的5’端设计合适的酶切位点,酶切后再克隆到相应酶切载体.
3. 保存在-20℃. 本产品pfu dna polymerase 的storage buffer组分为:50mm tris-hcl(ph8.2 at 25℃),0.1mm edta, 1mm dtt,50%甘油,0.05% chaps;
10x reaction buffer with mgso4的组分为: 200mm tris-hcl(ph8.8 at 25℃),100mm kcl,100mm (nh4)2so4, 20mm mgso4, 1.0% triton x-100, 1mg/ml bsa.
请问Pfu DNA Polymerase用于PCR能保证扩增多大的片段无错配?
请问!博凌科为 的 Pfu DNA Polymerase(含预混Mg2+的10×Pfu Buffer)怎么样啊?有没有谁
PCR为什么能扩增特意的基因片段呢
16S RDNA作为通用引物,用于细菌总DNA 提取后跑PCR,扩增出的片段是多少个bp呢?
设计pcr体系质粒扩增扩增片段1.8kb两引物都是87碱基pfu酶怎样设计预变性 变性 退火 延伸的时间和温度我的引物g
pcr扩增目的片段时,在第几个循环后才能出现目的片段长度的双链DNA分子?
请问做RT-PCR时,怎么根据扩增的片段长度确定dNTP的用量?
pcr扩增出来的东西与模版dna完全一致吗?还是说只扩增出模版中的某一段序列(我们需要的基因片段)?
PCR仪一般每分钟扩增多长的片段
PCR 中用到的Taq DNA Polymerase 试剂盒如何使用呢?
小片段DNA(100-200bp)的PCR扩增
PCR扩增DNA的操作里 为什么要用引物?