为什么篮斑做PCR菌液鉴定也能P出来条带呢
来源:学生作业帮 编辑:大师作文网作业帮 分类:综合作业 时间:2024/09/23 00:39:37
为什么篮斑做PCR菌液鉴定也能P出来条带呢
我用蓝白斑做的 T载体和目的片段连,为什么篮斑的 做PCR菌液鉴定也能P出来条带呢?
我用蓝白斑做的 T载体和目的片段连,为什么篮斑的 做PCR菌液鉴定也能P出来条带呢?
1 如果你用了目的片断特异的引物,那么可能是你连接时加的目的片断过多,菌表面粘附了目的片段(我曾经在没有斑的地方蘸一下,也能P出目的带),这样验证阳性克隆时建议你
1〉用T-vector两端的测序引物(如M13F+R),做个PCR,看能否扩出目的大小的带,如果有,说明肯定有片断连入T载体;如果能用一个测序引物和一个你自己的引物扩增就更好了,不但可以确定插入的方向还可以肯定是你的片断插入.
2〉如果你没有这些引物,可以抽出质粒后,用你的特异引物,进行较少循环数的扩增,如果能拿到很亮的带,那么很可能是阳性;因为提质粒后蘸附的片断会很少,而质粒作模板有利于目的基因的克隆;当然你也可以酶切验证.
2 有些片断较短,插入后并没有导致LacZ的移码,仍然会显出蓝色,所以有时蓝色不一定 ,没有目的片断插入,特别是当满板都是淡蓝时.
1〉用T-vector两端的测序引物(如M13F+R),做个PCR,看能否扩出目的大小的带,如果有,说明肯定有片断连入T载体;如果能用一个测序引物和一个你自己的引物扩增就更好了,不但可以确定插入的方向还可以肯定是你的片断插入.
2〉如果你没有这些引物,可以抽出质粒后,用你的特异引物,进行较少循环数的扩增,如果能拿到很亮的带,那么很可能是阳性;因为提质粒后蘸附的片断会很少,而质粒作模板有利于目的基因的克隆;当然你也可以酶切验证.
2 有些片断较短,插入后并没有导致LacZ的移码,仍然会显出蓝色,所以有时蓝色不一定 ,没有目的片断插入,特别是当满板都是淡蓝时.
农杆菌菌液PCR为什么会有两条带?
[菌液PCR,测序,DNA提取,求助]菌液PCR的时候能P出目的条带,为什么测序却完全不正确?
为什么我的目的基因连接克隆载体转化、提质粒后,酶切鉴定正确,而质粒PCR和菌液PCR鉴定都不正确呢?着急
PCR扩增不出来条带的原因?
PCR 空白都能P出来 是怎么回事?
为什么我的RT-PCR内参跑不出来.目的条带到是跑出来了
PCR电泳,为什么没有条带啊?
我做的RT-PCR怎么样让内参一致?刚入门 老板让做内参的条件 反复做也没有要P出来的目的条带 我的退火温度是55 可以
【求助】菌落PCR有目的条带与菌液PCR却什么都没有?
求PCR,PCR获得的目的基因中含有SalI酶切位点,而引物也引入了salI位点,现在一双酶切就切出来3条带,
PCR有扩出来条带,但目的条带不是太亮就有什么原因
为什么我们做PCR扩增后条带出不来?