制备高效率感受态的方法是什么?

制备高效率感受态的方法是什么?

液氮或低温冰箱中取出的大肠杆菌*E.COLI DH5,JM109,HB101等,在LB平板上划线,37度过夜至长出单菌落.挑直径1-3毫米的单菌落*可多个,接种到250毫升/3升锥形瓶 或80毫升/1升锥形瓶的SOB培养基.培养基量不可再多,会影响效率.在18度 150-250RPM 培养19-50小时*没有冷却摇床的可在室温,但不可高于37度.OD600约0.4-0.8时停止培养,放在冰水中冷却10分钟4度,300RPM离心15分钟,更多质量检测、分析测试、化学计量、标准物质相关技术资料请参考国家标准物质中检所网站,进口标准物质请参考 http://www.rmhot.com/plist_5/plist_5_20_0_1.html .回收菌体去掉上清后,用1/3体积的冰冷TB溶液悬浮,在冷10分钟再次离心回收菌体用1/12.5体积的TB悬浮,添加最终浓度为7%的DMSO,再冷却10分钟0.1-1毫升分装,直接在液氮中冻上.在液氮或-80度保存.TB溶液*TRANSFORMATION BUFFERPIPES 3.0G 10mMCaCl2.2H2O 2.2g 15mMKCl 18.6g 250mMadd water up to 950ml用 5N KOH 调PH至6.7-6.8*低PH不溶在加终浓度未55mM的MnCl2.4H2O 10.9g定溶到1升,过滤灭菌,4度保存.但有人提出,冻存后转化效率降低,且这种方法不适合大质粒.【zihudie】 （1）将置于液氮保存的大肠杆菌划线在LB平板上,37℃培养活化.（2）挑取经活化的大肠杆菌单菌落于SOC液体培养基,18℃,200-250rpm培养.（3）当OD600=0.5-0.8时,用预冷的40mL离心管于4℃,8000rpm离心10min,收集菌体.（4）用预冷的TB Buffer重悬菌体,4℃,8000rpm离心10min,收集菌体.（5）重复第4步操作.（6）用8mL预冷的TB Buffer重悬菌体,缓慢加入DMSO至终浓度7% .（7）冰浴10min后,分装保存于液氮中.本法效率极高,建议大家采纳【yog】1.单菌落-------2ml LB 37度 120RPM过夜------1%转接-------37度 200RPM2小时(OD到0.0.5)2.2ml,冰浴15min,4度,6000RPM 5min,弃上清,悬浮于1ml0.1MCaCl2中,冰浴20min3.4度,6000RPM 10min,重悬浮于200ul 0.1MCaCl2中,冰浴30min建议用TSS法,简单方便,比氯化钙法的转化效率高.别的菌可能不一定适用.以下为转贴,具体方法请最好查阅文献.E.coli感受态细胞制备方法:单菌落平板至2ml LB,37 oC 250 r/m ovn,1ml 转至50 ml LB,37oC 250 r/m至 A600=0.2-0.4离心后用10毫升TSS重悬后,分装 -70oC保存.尽量冰上操作.转化:加质粒(