PCR扩增出来几条带,怎么改进
来源:学生作业帮 编辑:大师作文网作业帮 分类:生物作业 时间:2024/10/08 10:59:52
PCR扩增出来几条带,怎么改进
我扩增的是霉菌18rDNA,大小是1600,PCR体系是50的,条件是94,3min;94,1min;55,1min,72,1min,72,10min.30个循环,按道理来说,电泳后应该只有一条带,但我的有四条带,有三条在1000--2000之间,且靠的很近,另一条比2000大,这是怎么回事啊?要怎样改进啊?
我扩增的是霉菌18rDNA,大小是1600,PCR体系是50的,条件是94,3min;94,1min;55,1min,72,1min,72,10min.30个循环,按道理来说,电泳后应该只有一条带,但我的有四条带,有三条在1000--2000之间,且靠的很近,另一条比2000大,这是怎么回事啊?要怎样改进啊?
两方面考虑:
1 改善PCR反应条件,从你提供的情况看,55度退火太低.建议做个温度梯度PCR,在55度到67度间,每升高2度,做一个反应.另建议将反应体系设为20微升(温度升降过程易于达到目标值).
2. 如果通过改变退火温度,仍然达不到想要效果,考虑模板是否合适;此外,建议对引物重新设计,适当增长引物长度,改变引物位置.
考虑到了上述因素,一般来说,没道理做不出一条带的.
1 改善PCR反应条件,从你提供的情况看,55度退火太低.建议做个温度梯度PCR,在55度到67度间,每升高2度,做一个反应.另建议将反应体系设为20微升(温度升降过程易于达到目标值).
2. 如果通过改变退火温度,仍然达不到想要效果,考虑模板是否合适;此外,建议对引物重新设计,适当增长引物长度,改变引物位置.
考虑到了上述因素,一般来说,没道理做不出一条带的.
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