有没有做膜蛋白提取的,
来源:学生作业帮 编辑:大师作文网作业帮 分类:生物作业 时间:2024/11/07 12:37:38
有没有做膜蛋白提取的,
膜蛋白很难做的,做得也不太多.给你一点点参考的资料
膜蛋白丰度低,难制备,表达的目标蛋白质缺乏足够的插膜及折叠过程,或者缺少翻译后修饰,异原过表达的膜蛋白质经常表达量较低或者无活性.
如果是构建成组氨酸标签的膜蛋白.
可以试试裂解缓冲液:20mM 磷酸钠,100mM NaCl,2mM MgCl2,20mM 咪唑,0.5 mM TECP,1mg/ml 溶菌酶,1mM EDTA ,1-2%的去污剂,pH7.4
His柱的结合缓冲液:20mM 磷酸钠,500mM NaCl,20-40mM 咪唑,0.5mM TECP,1-2%
去污剂,pH7.4(合适的咪唑浓度要依不同蛋白质的特点而定,一般20-40mM 咪唑对大多数蛋白质都比较合适).
预洗缓冲液:20mM 磷酸钠,500mM NaCl,20-40 mM 咪唑,0.5mM TECP,0.03%
DDM,1-2%去污剂,pH7.4.
洗脱缓冲液:20mM 磷酸钠,500mM NaCl,500 mM 咪唑,0.5mM TECP,0.03%
DDM,1-2%去污剂,pH7.4.
膜蛋白丰度低,难制备,表达的目标蛋白质缺乏足够的插膜及折叠过程,或者缺少翻译后修饰,异原过表达的膜蛋白质经常表达量较低或者无活性.
如果是构建成组氨酸标签的膜蛋白.
可以试试裂解缓冲液:20mM 磷酸钠,100mM NaCl,2mM MgCl2,20mM 咪唑,0.5 mM TECP,1mg/ml 溶菌酶,1mM EDTA ,1-2%的去污剂,pH7.4
His柱的结合缓冲液:20mM 磷酸钠,500mM NaCl,20-40mM 咪唑,0.5mM TECP,1-2%
去污剂,pH7.4(合适的咪唑浓度要依不同蛋白质的特点而定,一般20-40mM 咪唑对大多数蛋白质都比较合适).
预洗缓冲液:20mM 磷酸钠,500mM NaCl,20-40 mM 咪唑,0.5mM TECP,0.03%
DDM,1-2%去污剂,pH7.4.
洗脱缓冲液:20mM 磷酸钠,500mM NaCl,500 mM 咪唑,0.5mM TECP,0.03%
DDM,1-2%去污剂,pH7.4.
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