大师作文网细胞纯化是原代培养前还是传代培养前
来源：学生作业帮 编辑：大师作文网作业帮 分类：生物作业 时间：2024/11/10 16:14:18
细胞纯化是原代培养前还是传代培养前
细胞系的建立
细胞系的建立
你说的用酶消化法的人工纯化吧,
酶消化法是比较常用的纯化方法,不仅对贴壁细胞可行,能利用上皮细胞和成纤维细胞对胰蛋白酶的耐受性不同,是两者分开,达到纯化的目的；另外对贴壁细胞与半贴壁细胞及黏附细胞间的分离纯化也是十分有效的.
（1）上皮细胞与成纤维细胞的分离纯化：
两者在胰蛋白酶的作用下,由于成纤维细胞先脱壁,二上皮细胞要消化相当长的时间才脱壁,特别是在原代细胞初次传代和早期传代中两种差别尤为明显,故可采用多次差别消化方法将上皮细胞和成纤维细胞分开,方法步骤如下.
采用常规消化传代方式将0.25%胰蛋白酶注入培养瓶内两次,每次加1ml（25ml培养瓶）,来回轻摇1-2次,使胰蛋白酶流过所有细胞表面,然后倒掉.
盖好瓶塞,将培养瓶放在倒置显微镜下观察,发现成纤维细胞变园,部分脱落,立即加入2ml有血清的培养基终止消化.
用弯头吸管轻轻吹打成纤维细胞生长区域（可事先在镜下用记号笔在培养瓶上划出记号）.吹打时不要用力,也不要吹打上皮细胞生长区域.吹打结束后,再用少量培养基漂洗一遍,然后加入适量培养基于瓶内继续培养,也可重复上述操作再进行一次.
隔几日后或下次传代时,再进行上述操作,进过几次处理,就可将成纤维细胞去除或者将两者分开.
由步骤可知是传代前.
酶消化法是比较常用的纯化方法,不仅对贴壁细胞可行,能利用上皮细胞和成纤维细胞对胰蛋白酶的耐受性不同,是两者分开,达到纯化的目的；另外对贴壁细胞与半贴壁细胞及黏附细胞间的分离纯化也是十分有效的.
（1）上皮细胞与成纤维细胞的分离纯化：
两者在胰蛋白酶的作用下,由于成纤维细胞先脱壁,二上皮细胞要消化相当长的时间才脱壁,特别是在原代细胞初次传代和早期传代中两种差别尤为明显,故可采用多次差别消化方法将上皮细胞和成纤维细胞分开,方法步骤如下.
采用常规消化传代方式将0.25%胰蛋白酶注入培养瓶内两次,每次加1ml（25ml培养瓶）,来回轻摇1-2次,使胰蛋白酶流过所有细胞表面,然后倒掉.
盖好瓶塞,将培养瓶放在倒置显微镜下观察,发现成纤维细胞变园,部分脱落,立即加入2ml有血清的培养基终止消化.
用弯头吸管轻轻吹打成纤维细胞生长区域（可事先在镜下用记号笔在培养瓶上划出记号）.吹打时不要用力,也不要吹打上皮细胞生长区域.吹打结束后,再用少量培养基漂洗一遍,然后加入适量培养基于瓶内继续培养,也可重复上述操作再进行一次.
隔几日后或下次传代时,再进行上述操作,进过几次处理,就可将成纤维细胞去除或者将两者分开.
由步骤可知是传代前.