什么是基因组DNA污染?为什么设计引物时要跨外显子?
来源:学生作业帮 编辑:大师作文网作业帮 分类:综合作业 时间:2024/10/01 02:32:26
什么是基因组DNA污染?为什么设计引物时要跨外显子?
看文献有这么一句话:“引物设计时应该考虑到引物要有不受基因组DNA污染影响的能力,即引物应该跨外显子,最好是引物能跨外显子的接头区”,请解释一下什么是"基因组DNA污染"?会对引物设计和PCR造成什么影响?引物为什么要跨外显子?为什么最好能跨外显子接头区?谢谢~~
看文献有这么一句话:“引物设计时应该考虑到引物要有不受基因组DNA污染影响的能力,即引物应该跨外显子,最好是引物能跨外显子的接头区”,请解释一下什么是"基因组DNA污染"?会对引物设计和PCR造成什么影响?引物为什么要跨外显子?为什么最好能跨外显子接头区?谢谢~~
提RNA的时候有可能混了基因组DNA.
这样的话,PCR的时候,假如这个基因根本没表达,结果因为混了DNA进去,PCR就可以P出结果.但是这个条带不是从RNA来的.这就是DNA污染,它会干扰PCR的结果.
可以在提取RNA后,用DNA酶处理,这样分解可能混入的DNA来避免.也可以通过合理设计引物来避免,即使有DNA混入,这样设计的引物也只扩增RNA,而不扩增DNA.
这就要求引物得最好设计成跨外显子接头.因为DNA上的基因外显子和内含子是隔开的,而RNA上内含子被切掉了,是外显子链接在一起.剩下的,自己想去吧,已经快接近结果了……
这样的话,PCR的时候,假如这个基因根本没表达,结果因为混了DNA进去,PCR就可以P出结果.但是这个条带不是从RNA来的.这就是DNA污染,它会干扰PCR的结果.
可以在提取RNA后,用DNA酶处理,这样分解可能混入的DNA来避免.也可以通过合理设计引物来避免,即使有DNA混入,这样设计的引物也只扩增RNA,而不扩增DNA.
这就要求引物得最好设计成跨外显子接头.因为DNA上的基因外显子和内含子是隔开的,而RNA上内含子被切掉了,是外显子链接在一起.剩下的,自己想去吧,已经快接近结果了……
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