关于平末端DNA加A的一些问题~
来源:学生作业帮 编辑:大师作文网作业帮 分类:生物作业 时间:2024/09/23 01:36:35
关于平末端DNA加A的一些问题~
刚刚学做克隆,看到网上有两种平末端DNA加A尾方法,一种是切胶回收后加,另一种是直接加在PCR产物中,想请问:
1.第二种加A方法,加Taq酶和dNTPs了,还要不要加buffer~
2.是在PCR 72度延伸时暂停加效果好,还是PCR后,再加效果好~
3.如何鉴定是不是加A尾成功了?有没什么方法做个阳性对照?
4.要不要加A尾成功了,再进行一次纯化,然后再连接载体呢?
刚刚学做克隆,看到网上有两种平末端DNA加A尾方法,一种是切胶回收后加,另一种是直接加在PCR产物中,想请问:
1.第二种加A方法,加Taq酶和dNTPs了,还要不要加buffer~
2.是在PCR 72度延伸时暂停加效果好,还是PCR后,再加效果好~
3.如何鉴定是不是加A尾成功了?有没什么方法做个阳性对照?
4.要不要加A尾成功了,再进行一次纯化,然后再连接载体呢?
是一个人的问题么.
你这个平末端DNA是怎么得到?如果是PCR得到的话就表示用的酶带有外切酶活性,如果不回收一下的话再加A还是会被切掉的 如果是直接拿到的一个平末端DNA片段那就可以用第二种方法了 不过还是要加buffer,就相当于做一次PCR,不过只要最后的延伸那步而已 鉴别加A成功就是连T载体了,最好还是纯化,这个又不麻烦
你这个平末端DNA是怎么得到?如果是PCR得到的话就表示用的酶带有外切酶活性,如果不回收一下的话再加A还是会被切掉的 如果是直接拿到的一个平末端DNA片段那就可以用第二种方法了 不过还是要加buffer,就相当于做一次PCR,不过只要最后的延伸那步而已 鉴别加A成功就是连T载体了,最好还是纯化,这个又不麻烦
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