大师作文网TA克隆时,如何选择T载体?
来源：学生作业帮 编辑：大师作文网作业帮 分类：综合作业 时间：2024/09/20 06:24:07
TA克隆时,如何选择T载体?
在三博克隆测序,PCR产物长度只有85bp,选择什么样的T载体比较好呢?
在三博克隆测序,PCR产物长度只有85bp,选择什么样的T载体比较好呢?
现在商业T载体很多,比如的pMD系列,对你都是适用的.85bp产物应该比较好连接,你就按照片段、载体摩尔比5-10的样子,一般很容易连接上.
再问： 我直接让公司克隆的 三博让我自己选择载体 但我对此不了解；提供的载体有：pGEM-T, PMD18-T PUC18, PUC19 请问选择哪个最好呢？ 非常感谢！
再答： 这些T载体的区别就在于多克隆位点的限制性内切酶不同，如果你后续试验对酶切位点没要求的话，这几个都可以。我用过pMD18-T这个，其他几个也是一些实验室比较常用的。
再问： 克隆后直接测序 不知道酶切位点是否有影响 ？
再答： 这个对测序不会有影响。但你要考虑到后面的实验，如果你仅仅是为了测序，那都没问题。如果你后续是想利用这段序列做实验，比如连接到原核表达载体上面，那你就要考虑酶切位点的问题了。
再问： 我直接让公司克隆的 三博让我自己选择载体 但我对此不了解；提供的载体有：pGEM-T, PMD18-T PUC18, PUC19 请问选择哪个最好呢？ 非常感谢！
再答： 这些T载体的区别就在于多克隆位点的限制性内切酶不同，如果你后续试验对酶切位点没要求的话，这几个都可以。我用过pMD18-T这个，其他几个也是一些实验室比较常用的。
再问： 克隆后直接测序 不知道酶切位点是否有影响 ？
再答： 这个对测序不会有影响。但你要考虑到后面的实验，如果你仅仅是为了测序，那都没问题。如果你后续是想利用这段序列做实验，比如连接到原核表达载体上面，那你就要考虑酶切位点的问题了。