将目的基因导入受体细胞此步骤该如何检测?
来源:学生作业帮 编辑:大师作文网作业帮 分类:生物作业 时间:2024/09/20 15:28:14
将目的基因导入受体细胞此步骤该如何检测?
该检测需要以下几个环节
1、检测重组载体是否导入受体细胞
2、重组载体内是否重组入外源基因
3、重组载体内的外源基因是否为目的基因
第一步 通常是使用载体自带的标记基因 (主要为抗性基因)完成 如常见的T-Vector 为氨苄抗性 使用适量的氨苄培养基进行筛选 生长出来即为导入重组载体 其他载体类似
第二步 通常也使用载体自带标记 如T-Vector的LacZ基因 可以使用IPTG(异丙基硫代半乳糖苷)作为安慰诱导剂进行诱导 在含有X-Gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-半乳糖苷)的培养基中筛选 白色斑点即为插入阳性第三步 通常使用两种或以上的不同原理的验证方法验证 如酶切验证和PCR验证加以测序验证进行确认 导入的片段是否为目的基因
1、检测重组载体是否导入受体细胞
2、重组载体内是否重组入外源基因
3、重组载体内的外源基因是否为目的基因
第一步 通常是使用载体自带的标记基因 (主要为抗性基因)完成 如常见的T-Vector 为氨苄抗性 使用适量的氨苄培养基进行筛选 生长出来即为导入重组载体 其他载体类似
第二步 通常也使用载体自带标记 如T-Vector的LacZ基因 可以使用IPTG(异丙基硫代半乳糖苷)作为安慰诱导剂进行诱导 在含有X-Gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-半乳糖苷)的培养基中筛选 白色斑点即为插入阳性第三步 通常使用两种或以上的不同原理的验证方法验证 如酶切验证和PCR验证加以测序验证进行确认 导入的片段是否为目的基因
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